阿尔茨海默病患者和模型小鼠前额叶皮层lncRNAs的表达及功能分析

发布时间：2022-08-29 18:18

　　背景阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种老年人中常见的以进行性认知功能障碍和行为损害为特征的神经退行性疾病。AD的主要病理改变为细胞外Aβ淀粉样蛋白沉积和细胞内tau蛋白异常磷酸化伴随突触和神经元的丢失,主要累及部位为皮层和海马。目前该病缺乏有效药物治疗,其病因与发病机制尚未阐明。长链非编码RNA（long non-coding RNAs,IncRNAs）是一类长度超过200个核苷酸,无或少有蛋白编码功能的非编码RNA分子。可参与多种途径基因表达调控过程。目前关于IncRNAs与AD的研究中,差异表达的IncRNAs及其功能研究主要集中于海马区,尚无前额叶皮层（prefrontal cortex,PFC）差异分析的系统阐述。有文献报道,在对118例AD患者神经影像学的观察中发现,AD患者常出现的妄想,淡漠,抑郁等精神症状与PFC紧密相关。因此本研究采用高通量测序的方法检测IncRNAs在AD患者与正常对照组PFC,AD模型小鼠和野生型小鼠PFC转录组改变,筛选出AD相关差异性表达的mRNA和IncRNAs并进行比较分析。随后对AD患者转录组数据进一步挖掘,... 

【文章页数】：149 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中英文缩略词
摘要
Abstract
第一部分 阿尔茨海默病患者与同龄正常人前额叶皮层lncRNAs表达及功能分析
    摘要
    Abstract
    前言
    材料和方法
        1.实验材料
            1.1 阿尔茨海默病患者和同龄正常人PFC组织
            1.2 主要试剂与仪器
        2.实验方法
            2.1 脑组织总RNA提取与质控
            2.2 LncRNAs测序实验流程(建库和测序)
            2.3 信息分析流程
            2.4 qRT-PCR实验验证
    结果
        1.总RNA提取及质量检测
        2.LncRNAs测序原始数据基本情况
        3.基因组比对
        4.LncRNAs和mRNA转录本表达
        5.差异表达分析
        6.qRT-PCR验证部分差异表达的lncRNAs和mRNA
        7.功能分析
        8.差异表达lncRNAs KEGG通路分析
        9.差异表达lncRNAs-mRNA互作分析
    讨论
    小结
第二部分 APP/PS1双转基因模型小鼠与野生型小鼠前额叶皮层lncRNAs表达及功能分析
    摘要
    Abstract
    前言
    材料和方法
        1.实验材料
            1.1 APP/PS1双转基因模型小鼠与野生型C57小鼠PFC组织
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
        2.实验方法
            2.1 转基因动物的鉴定
            2.2 脑组织处理
            2.3 脑组织总RNA提取与质控
            2.4 lncRNAs测序实验流程(建库和测序)
            2.5 信息分析流程(图2-3)
            2.6 qRT-PCR实验验证
    结果
        1.APP swe/PS1 AE9(PAP)双转基因AD模型小鼠基因型鉴定
        2.总RNA提取及质量检测
        3.lncRNAs测序原始数据基本情况
        4.基因组化对
        5.lncRNAs和mRNA转录本表达
        6.差异表达分析
        7.qRT-PCR验证部分差异表达的lncRNAs和mRNA
        8.功能分析
        9.差异表达lncRNAs KEGG通路分析
        10.差异表达lncRNAs-mRNA互作分析
    讨论
    小结
第三部分 AD患者与AD模型小鼠前额叶皮层lncRNAs表达及功能比较分析
    摘要
    Abstract
    前言
    材料和方法
        1.实验材料
        2.实验方法
            2.1 聚类分析算法
            2.2 DAVID基因功能富集分析软件
            2.3 同源基因表达模式评估
            2.4 同源lncRNAs表达模式评估
            2.5 lncRNAs-mRNA功能调控分析
    结果
        1.人和小鼠lncRNAs测序原始数据基本情况
        2.人与小鼠PFC同源mRNA和lncRNAs表达模式
        3.人与小鼠PFC高表达mRNA和lncRNAs的生物学功能
        4.AD患者和AD模型小鼠差异表达mRNA和lncRNAs比较分析
        5.AD患者与AD模型小鼠PFC差异表达lncRNAs GO分析比较
        6.AD患者与AD模型小鼠PFC差异表达lncRNAs KEGG分析比较
    讨论
    小结
第四部分 lncRNA MEG3通过调节HDAC2和突触相关蛋白表达参与认知功能损伤的作用
    摘要
    Abstract
    前言
    材料和方法
        1.实验材料
            1.1 细胞系
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器和材料
            1.4 主要试剂配制
        2.实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 miRNA-656-3p, novol-21-5p, MEG3和mRNA表达水平检测
            2.3 表达载体构建
            2.4 慢病毒制备及稳转细胞系的构建
            2.5 腺病毒制备及转染
            2.6 细胞分选
            2.7 CCK8检测细胞增殖
            2.8 细胞免疫荧光化学染色
            2.9 RNAscope原位杂交
            2.10 细胞蛋白提取
            2.11 蛋白质免疫印迹(Western Blot)
        3.统计方法
    结果
        1.MEG3共表达分析及在脑组织中的验证
        2.SH-SY5Y细胞病毒转染效率检测
        3.MEG3抑制神经细胞增殖
        4.MEG3损伤SY5Y细胞形态
        5.MEG3增强HDAC2的表达
        6.MEG3调控突触相关蛋白的表达
        7.miR-656-3p和novel-21-5p在各组织中及MEG3转染后的表达
    讨论
    小结
参考文献
个人简历
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]p53 mutations in colorectal cancer-molecular pathogenesis and pharmacological reactivation[J]. Xiao-Lan Li,Jianbiao Zhou,Zhi-Rong Chen,Wee-Joo Chng.  World Journal of Gastroenterology. 2015(01)



本文编号：3678781