分泌表达抗Aβ 42 胞内抗体重组腺相关病毒的构建

发布时间：2024-12-01 22:32

　　目的构建分泌表达抗Aβ42胞内抗体的重组腺相关病毒,为进一步研究胞内抗体靶向识别、清除细胞内Aβ42以达到诊断和治疗AD提供了基础材料。 方法①根据GenBank提供的Aβ42单克隆抗体的已知序列(专利号WO2008/156621 A1),选用Aβ42单克隆抗体重、轻链可变区CDR1和CDR3及其重链的骨架结构,设计构建了细胞内抗体mAbA/B, (mAbA:VHCDR1-VLCDR3; mAbB: VHCDR3-VLCDR1)应用DNASIS计算机软件设计引物。用非对称互补引物／模板法,上游5’端加入保护碱基和PmaCI酶切位点,下游3’端加入终止密码子TAG和BamHI酶切位点,通过两次PCR获得目的片段。用PmaCI和BamHI双酶切,得到含有粘着末端的目的基因片断。②将纯化后的mAbA/B分别与载有NT4信号肽、TAT穿膜肽、6×His标签肽的pSSHG/NT4-TAT-His载体用DNA连接酶相连,构建重组质粒pSSHG/NT4-TAT-His-mAbA/B。③采用磷酸钙沉淀法三质粒共转染293细胞,获得重组携带NT4-TAT-His-mAbA/B的AAV载体,RT-PC...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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提要
中文摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 前言
    1.2 研究背景回顾
第2章 mAbA/B基因克隆及序列分析
    2.1 构建方案
    2.2 材料和方法
    2.3 结果
第3章 NT4-TAT-His-mAbA/B融合基因的构建及鉴定
    3.1 构建方案
    3.2 材料和方法
    3.3 结果
第4章 pssHG/NT4-TAT-His-mAbA/B重组腺相关病毒包装及滴度测定
    4.1 重组腺相关病毒pssHG/NT4-TAT-His-mAbA/B的构建方案
    4.2 材料和方法
    4.3 结果
第5章 重组腺相关病毒在Hela中表达及其与Aβ₄₂细胞内结合初步探索细胞内抗体的保护作用
    5.1 材料和方法
    5.2 结果
第6章 讨论
    6.1 构建细胞内抗体的意义
    6.2 pssHG/NT4-TAT-His-mAbA/B重组腺相关病毒载体构建、包装及其意义
    6.3 本研究的意义及创新
    6.4 展望
第7章 结论
参考文献
作者简介及科研成果
致谢



本文编号：4013862