miR-124-3p通过负调控Caveolin-1表达在AD中发挥神经保护作用的机制研究

发布时间：2017-07-14 02:10

  本文关键词：miR-124-3p通过负调控Caveolin-1表达在AD中发挥神经保护作用的机制研究

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【摘要】：目的：阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是最常见的痴呆类型,其发病机制仍未明确。microRNA(miRNA)在神经系统疾病的发生、发展过程中的作用日益受到重视,近年来,miR-124在神经系统退行性疾病中作用及机制的研究已经成为国内外研究的热点。Caveolin-1是细胞膜小凹的标志蛋白,与AD密切相关。本实验通过AD细胞模型证实了miR-124-3β对Caveolin-1的靶向抑制作用,研究miR-124-3β通过调控Caveolin-1的表达对细胞内Tau蛋白磷酸化水平及细胞凋亡水平的影响,并进一步探索其发挥作用的机制,以期为AD的防治提供新的靶点。方法：体外培养野生型N2a (N2a/WT)和N2a/APPswe细胞,荧光定量PCR及Western blot分别检测细胞内miR-124-3β、APP和Caveolin-1的表达；双荧光素酶报告实验分析miR-124-3β与Caveolin-1之间靶向调控关系；N2a/APPswe细胞分别转染miR-124-3β模拟物(mimics)、Caveolin-1过表达载体(pcDNA-Caveolin-1)及Caveolin-1干扰RNA(Caveolin-l-siRNA)后,荧光定量PCR检测Caveolin-1、Tau mRNA表达水平的变化,流式细胞术分析细胞凋亡水平,Western blot分别检测Caveolin-1、Tau和Tau-Ser404、GSK-3β、GSK-3p-Ser9、PI3K、 Akt、Akt-Ser473蛋白表达水平的变化。结果：与WT组比较,APPswe组miR-124-3β表达明显降低(P0.01),APP的mRNA和蛋白表达均显著升高(P0.01),Caveolin-1 mRNA和蛋白表达均显著升高(P0.001；P0.05)；双荧光素酶报告实验表明,与突变型载体转染组相比,野生型载体共染组的相对荧光素酶活性明显减弱(P0.01)；N2a/APPswe细胞分别转染miR-124-3β mimics或者Caveolin-1干扰RNA后,细胞凋亡率降低(P0.001),Caveolin-1表达降低(P0.001),Tau-Ser404/Tau表达水平降低(P 0.01),PI3K表达水平升高(P0.01),Akt-Ser473/Akt表达水平升高(P 0.01), GSK-3β-Ser9/GSK-3β表达水平升高(P0.001)；N2a/APPswe细胞转染Caveolin-1过表达载体后,细胞凋亡率增加(P0.001),Tau-Ser404/Tau表达水平升高(P0.01), PI3K表达水平降低(P0.001),Akt-Ser473/Akt表达水平降低(P0.001),GSK-3p-Ser9/GSK-3β表达水平降低(P0.001)。结论：Caveolin-1上游受到miR-124-3β的靶向负性调控,下游通过调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路的活性进而影响Tau蛋白的磷酸化水平；因此AD中可能存在miR-124-3β-Caveolin-1-PI3K/Akt/GSK3β的调控机制,抑制AD细胞中Tau蛋白异常过度磷酸化而发挥神经保护作用(抑制细胞凋亡),这将为AD的防治提供新的思路。
【关键词】：miR-124-3p 阿尔茨海默病 Tau蛋白 Caveolin-1 糖原合成酶激酶-3β
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 1 材料与仪器14-16
• 2 实验方法16-25
• 3 结果25-36
• 4 讨论36-42
• 全文总结42-44
• 参考文献44-50
• 文献综述50-59
• 参考文献56-59
• 致谢59-60
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录60

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本文编号：539249