突触相关蛋白SYN及GAP-43在维生素D缺乏致大鼠学习记忆功能障碍的作用研究
本文关键词：突触相关蛋白SYN及GAP-43在维生素D缺乏致大鼠学习记忆功能障碍的作用研究
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【摘要】：目的:研究血管性痴呆与维生素D之间的关系;观察维生素D(VitD)缺乏模型大鼠突触相关蛋白突触素(synaptophysin,SYN)及神经生长相关蛋白43(growth-associatedprotein-43,GAP-43)的表达及维生素D对其表达的影响,探讨维生素D对大鼠学习记忆能力的作用及其对突触可塑性的影响。方法:1.临床研究:部分采用平行、随机、对照实验方案,选择柳州市中医院2014年12月至2015年12月之间,纳入符合血管性痴呆诊断标准患者30例以及健康体检中心正常者60例,比较两组血清25(OH)D3水平。2.实验研究:根据李清华等方法,将50只SD大鼠随机分为对照组(Control group,n=10)给予普通饲料,模型组即维生素D缺乏组((Model group,n=10)、低剂量治疗组(Low dose group,n=10)、中剂量治疗组(Middle dose group,n=10)、高剂量治疗组(High dose group,n=10)给予维生素D缺乏饲料饲养9周,光照采用无紫外线光的白炽灯,昼夜节律12小时/12小时。在第10周开始予以维生素D补充剂灌胃2周,第13周采用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习及记忆能力,并在规定的时间段内处死大鼠取其脑组织。采用ELISA法检测1,25DHVD3水平;Western blot检测SNY和GAP-43蛋白表达。所得数据采用SPSS23.0统计学分析软件,数据采用均数±标准差()表示,两样本均数间比较采用t检验,组间比较用单因素方差分析(one-way ANOVA)。方差齐时采用LSD法,方差不齐采用Dunnett's T3法,以p0.05为差异有统计学意义。结果:1.临床研究:与对照组比较,VaD组血清25(OH)D3降低(p0.05);2.行为学测试:在训练第2、3、4、5天中,与对照组比较,模型组逃避潜伏期长(p㩳0.05)。与对照组比较,模型组第1次穿越目标象限(第三象限)时间、目标象限(第三象限)穿越次数均有显著差异(p㩳0.05)。与模型组比较,高剂量组第2天逃避潜伏期有统计学意义(p㩳0.05)。高剂量组和模型组仅仅在目标象限(第三象限)穿越次数上存在显著差异(p㩳0.05)。3.SNY和GAP-43表达:与空白组对照比较,模型组SYN蛋白表达升高(p㩳0.05);与模型组比较,高剂量组SYN蛋白表达均升高(p0.05);与空白组对照组比较,模型组GAP-43蛋白表达升高(p0.05);与模型组比较,高剂量组GAP-43蛋白表达均升高(p0.05)。结论:1.VaD患者血清25(OH)D3水平降低。2.维生素D缺乏会造成大鼠学习记忆能力减退。3.长时间补充维生素D可能有益于突触重塑,可以改善维生素D缺乏大鼠的学习及记忆能力。4.维生素D改善大鼠学习及记忆能力的作用,可能与增加突触相关蛋白SNY及GAP-43蛋白的表达有关。
【关键词】：维生素D 血管性痴呆 认知障碍 SYN GAP-43
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.1
【目录】：
- 中文摘要3-5
- ABSTRACT5-11
- 引言11-13
- 第一部分：临床观察 血管性痴呆患者维生素 D 水平分析13-17
- 1 研究对象13-15
- 1.1 病例来源13
- 1.2 VaD组病例选择13-14
- 1.2.1 痴呆诊断标准13
- 1.2.2 VaD诊断标准13
- 1.2.3 痴呆分级标准13
- 1.2.4 VaD组纳入标准13-14
- 1.2.5 VaD组排除标准14
- 1.3 对照组病例选择14
- 1.4 伦理学要求14-15
- 2 研究方法15
- 2.1 基线评估15
- 2.2 血清25(OH)D3水平检测15
- 2.3 统计学分析15
- 3 实验结果15-17
- 3.1 两组人口学特征比较15-16
- 3.2 血清 25(OH)D3含量16-17
- 第二部分：实验研究 突触相关蛋白SYN及GAP-43在维生素D缺乏致大鼠学习记忆功能障碍的作用研究17-36
- 1 实验材料17-21
- 1.1 研究对象17-18
- 1.2 主要试剂18-21
- 1.3 主要仪器设备及耗材21
- 2 实验方法21-29
- 2.1 建立维生素D缺乏大鼠模型21-22
- 2.2 技术路线22
- 2.3 行为学测试22-24
- 2.3.1 Morris水迷宫装置简介23
- 2.3.2 定位航行实验23
- 2.3.3 空间探索实验23-24
- 2.3.4 具体操作注意事项24
- 2.4 实验分组及药物干预24-25
- 2.5 大鼠处死及取材25
- 2.6 酶联免疫吸附（ELISA）法检测 1,25DHVD3含量25-26
- 2.7 采用Western blot检测SYN和GAP-43 蛋白表达26-29
- 2.8 统计学分析29
- 3 实验结果29-36
- 3.1 各组别 1,25DHVD3含量检测29
- 3.2 各组别行为学测试结果29-33
- 3.2.1 维生素D缺乏对大鼠学习记忆能力的影响29-30
- 3.2.2 维生素D补充处理后大鼠学习记忆能力的影响30-33
- 3.3 突触相关蛋白SYN蛋白表达33
- 3.4 GAP-43蛋白含量表达比较33-36
- 讨论36-46
- 1 中医对认知障碍、维生素D的认识36-37
- 2 现代医学对认知障碍的认识37-39
- 3 维生素D对神经系统疾病的作用39-42
- 4 维生素D对突触相关蛋白SYN及GAP-43 蛋白作用机制42-46
- 结论46-47
- 局限性及展望47-48
- 参考文献48-55
- 附录55-61
- 英文缩略词表61-62
- 综述62-71
- 参考文献67-71
- 致谢71-72
- 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果72
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