IL-6对BV2小胶质细胞系铁代谢相关蛋白的影响及其调控机制研究

发布时间：2017-07-27 06:16

  本文关键词：IL-6对BV2小胶质细胞系铁代谢相关蛋白的影响及其调控机制研究

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【摘要】：帕金森病(Parkinson's disease,PD)以静止性震颤、肌强直、运动迟缓、姿势反射障碍为主要症状。病理上表现为中脑黑质致密带(substantia nigra pars compa ct,SNpc)中多巴胺(dopamine,DA)能神经元丢失,进而导致纹状体中DA含量下降。在可能引起PD发病的原因中,神经炎症越来越引起人们的关注。PD患者黑质(substantia nigra,SN)中出现小胶质细胞的激活,脑脊液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)和白细胞介素6(interleukin-6, IL-6)含量出现了上升。1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine, MPTP)、6-羟基多巴胺(6-hydroxy dopamine,6-OHDA)、鱼藤酮、annonacin都能引起PD动物模型SN区中小胶质细胞的激活。PD患者SN中炎症发生时,激活的小胶质细胞中铁含量异常升高,并且激活的小胶质细胞可以影响到SNpc铁的聚集,此外本实验室前期已证明TNF-α、IL-1β可以影响神经元的铁代谢。那么小胶质细胞释放的IL-6是否会影响其自身铁代谢的变化?本实验应用细胞培养、MTT、荧光定量PCR、免疫印迹等多项研究技术,观察了铁对BV2小胶质细胞释放的IL-6的影响以及IL-6对BV2小胶质细、胞铁代谢的影响。结果如下： 1.100μmol/L枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate, FAC)处理BV2细胞12h后,BV2细胞中IL-6mRNA上调了30%,与对照组相比,差别有统计学意义(P0.05,n=6)。 2.选用30ng/ml、50ng/ml、100ng/ml IL-6处理BV2细胞24h,结果显示各组活性与对照组相比细胞的存活率没有变化(P0.05,n=4)。30ng/ml被选为后继实验中所应用浓度。 3.30ng/ml IL-6处理BV2细胞24h,BV2细胞中铁调节蛋白1(iron regulatory protein1,IRP1)的蛋白表达水平上调,与对照组相比,差别有统计学意义(P0.05,n=5)。 4.30ng/ml IL-6处理BV2细胞24h,BV2细胞中铁转出蛋白ferroportinl (FPN1)的蛋白表达水平下调,与对照组相比,差别有统计学意义(P0.05,n=5)。 5.30ng/ml IL-6处理BV2细胞1h,BV2细胞中磷酸化的JNK丝裂原活化蛋白激酶类(c-Jun N-terminal kinase,JNK)水平显著增加(P0.05,n=3)。 6.10μmol/L、20μmol/L SP600125处理BV2.细胞24h,处理组与对照组相比细胞的存活率没有变化(P0.05,n=4)。10μmol/L被选为后继实验中所应用浓度。7.预先用10μmol/L JNK特异型抑制剂SP600125处理BV2细胞1h后,加入30ng/ml IL-6继续作用24h,可以抑制由IL-6引起的IRP1蛋白表达水平上调,与IL-6处理组相比差别有显著性(P0.05,n=4)。 8.预先用10μ mol/L JNK特异型抑制剂SP600125处理BV2细胞1h后加入30ng/ml IL-6继续作用24h,可以抑制由IL-6引起的FPN1蛋白表达水平下调,与IL-6处理组相比有统计意义(P0.05,n=4)。 上述结果表明,FAC可增加BV2小胶质细胞IL-6mRNA的表达。IL-6可以使BV2小胶质细胞IRP1表达增加,FPN1表达降低。JNK抑制剂SP600125预处理可以阻断IL-6所引起的IRP1与FPN1蛋白的表达变化。本实验证实高铁环境下,BV2小胶质细胞合成IL-6增多,而IL-6可以调控BV2小胶质细胞铁代谢相关蛋白,该过程是通过JNK信号途径实现的。本研究为PD炎症发生与铁代谢异常的相互作用提供了强有力的实验基础与理论依据,并为PD的临床抗炎治疗提供了更加详实的实验基础。
【关键词】：小胶质细胞 白细胞介素6 铁调节蛋白1 ferroportin1 JNK
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 材料和方法9-20
• 1. 细胞培养9-10
• 2. FAC处理BV2细胞系对IL-6 mRNA表达的影响10-12
• 3. MTT法检测IL-6对细胞活性影响12-13
• 4. IL-6对BV2细胞中IRP1和FPN1蛋白表达水平的影响13-16
• 5. IL-6对BV2细胞JNK蛋白磷酸化水平的影响16-18
• 6. MTT法检测JNK抑制剂SP600125对细胞活性影响18
• 7. IL-6对BV2细胞中IRP1和FPN1蛋白表达水平调控机制的研究18-19
• 8. 数据处理19-20
• 结果20-27
• 1. FAC对BV2细胞IL-6表达的影响20
• 2. MTT法检测不同浓度IL-6作用BV2细胞24 h后细胞活性的变化20-21
• 3. IL-6对BV2细胞IRP1表达的影响21-22
• 4. IL-6对BV2细胞中FPN1表达的影响22
• 5. IL-6对BV2细胞中磷酸化JNK表达的影响22-23
• 6. MTT法检测不同浓度的JNK抑制剂SP600125作用BV2细胞24 h后细胞活性的变化23-24
• 7. SP600125预处理抑制了IL-6对BV2细胞IRP1蛋白表达的上调24-25
• 8. SP600125预处理可以抑制IL-6对BV2细胞FPN1表达的上调25-27
• 讨论27-32
• 参考文献32-40
• 综述40-66
• 参考文献53-66
• 攻读学位期间的研究成果66-67
• 致谢67-68

【参考文献】

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1 王佳;宋宁;姜宏;王俊;谢俊霞;;枸橼酸铁铵对小胶质细胞释放炎性因子的作用[J];青岛大学医学院学报;2012年03期

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本文编号：580132