PCSK9介导脂质对海马神经元及PC12细胞凋亡的影响及机制研究

发布时间：2017-07-30 10:24

  本文关键词：PCSK9介导脂质对海马神经元及PC12细胞凋亡的影响及机制研究

  更多相关文章： 高脂血症 阿尔茨海默病 枯草溶菌素转化酶9 氧化型低密度脂蛋白 神经细胞 凋亡 β淀粉样蛋白 β-分泌酶

【摘要】：阿尔茨海默症（Alzheimer's disease，AD）是一种多因素引起的，与年龄高度相关，以进行性认知障碍和记忆力损伤为主的中枢神经系统退行性疾病，是最常见的痴呆类型之一。神经细胞凋亡是其主要病理基础之一。高脂血症是AD等神经退行性疾病发生的高危因素，但是高脂血症与神经退行性疾病发生的机制并未完全阐明。本课题旨在研究脂质对神经细胞凋亡的影响及其机制，进而探索高脂血症导致AD等神经退行性疾病发生的机制。 目的：探讨PCSK9在高脂血症apoE (-/-)小鼠海马神经元凋亡中的表达情况及机制研究；观察PCSK9在不同浓度氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，oxLDL）诱导PC12神经细胞凋亡模型中的表达情况，抑制PCSK9表达对oxLDL诱导PC12细胞凋亡的影响，研究PCSK9介导脂质诱导神经细胞凋亡的分子机制。 方法：实验分为动物实验和细胞实验两部分。动物模型为18只6周龄apoE (-/-)小鼠，随机分为正常饮食组和高脂饮食组。喂养12周后取出海马组织进行冰冻切片，运用HE染色、油红O、Hoechst33258染色、免疫组织化学染色和改良Bielschowsky染色观察海马改变。细胞实验则是用不同浓度oxLDL处理PC12细胞24h，Hoechst33258染色检测细胞凋亡，RT-PCR、Western blot分别检测PCSK9和BACE1mRNA、蛋白的表达，ELISA检测培养液中Aβ40、Aβ42含量。筛选出有效的PCSK9siRNA转染入PC12细胞，48h后加入oxLDL处理24h，Hoechst33258染色观察细胞评价细胞凋亡，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot分别检测PCSK9、BACE1、Caspase3、Caspase9、Bcl-2、Bax的表达，ELISA检测培养液中Aβ40、Aβ42含量。 结果：与正常饮食组相比，高脂饮食组apoE (-/-)小鼠海马锥体细胞排列稀疏紊乱，细胞间隙增大，胞体肿胀，细胞核体积变小及浓染，呈核固缩，尤以CA3区明显，而CA1区病变不显著；神经细胞荷脂略有增加，凋亡增加，Aβ沉积略有增多；PCSK9、BACE1、Caspase3、Bax表达增加显著，Bcl-2表达稍增加。75mg/L oxLDL处理PC12细胞24h后，Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞。同时RT-PCR、Western blot检测发现，PCSK9mRNA和蛋白表达量呈浓度依赖性增加，75mg/L oxLDL组增加最明显；而BACE1mRNA和蛋白表达量及Aβ40、Aβ42含量都呈浓度依赖性降低，以75mg/L oxLDL组下降最明显。将筛选出来的PCSK9siRNA转染细胞48h后，再用oxLDL处理24h，Hoechst33258染色及流式细胞计数结果显示，转染siRNA组凋亡明显被抑制；Westernblot检测发现转染siRNA组Caspase3、Caspasee9、Bax表达降低，BACE1、Bcl-2表达和Aβ40、Aβ42含量增多。 结论：高脂血症可导致apoE (-/-)小鼠海马神经元凋亡增加，，其机制可能是与高脂血症时脑组织PCSK9表达上调继而激活Bcl-2/Bax-Caspase3信号途径和BACE1表达增加，Aβ含量增加有关。oxLDL对神经细胞凋亡具有双向调节作用，其机制在于oxLDL诱导神经细胞PCSK9表达增加，PCSK9表达增加一方面通过Bcl-2/Bax-Caspase（9，3）信号途径促使神经细胞凋亡；另一方面却通过降解BACE1，抑制APP/Aβ代谢途径，减少Aβ生成，从而抑制Aβ诱导的神经细胞凋亡。
【关键词】：高脂血症 阿尔茨海默病 枯草溶菌素转化酶9 氧化型低密度脂蛋白 神经细胞 凋亡 β淀粉样蛋白 β-分泌酶
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 前言8-10
• 实验材料10-12
• 1.1 细胞和主要试剂来源10-11
• 1.2 主要仪器11-12
• 实验方法12-18
• 一、动物实验12-13
• 二、细胞实验13-18
• 实验结果18-34
• 3.1 高脂饮食对 apoE (-/-)小鼠血浆 TC、TG、LDL-C 和 HDL-C 含量的影响18
• 3.2 高脂饮食对 apoE (-/-)小鼠海马脂质蓄积的影响18-19
• 3.3 高脂饮食对 apoE (-/-)小鼠海马显微形态学的影响19
• 3.4 高脂饮食对 apoE (-/-)小鼠海马神经元凋亡的影响19-20
• 3.5 高脂饮食对 apoE (-/-)小鼠海马神经元 Bcl-2、Bax 和 Caspase3 表达的影响20-22
• 3.6 高脂饮食对 apoE (-/-)小鼠海马神经元 PCSK9、BACE1 表达的影响22-24
• 3.7 高脂饮食对 apoE (-/-)小鼠海马 SP 沉积的影响24
• 3.8 oxLDL 对 PC12 细胞脂质蓄积的影响24-25
• 3.9 oxLDL 对 PC12 细胞凋亡的影响25
• 3.10 oxLDL 对 PC12 细胞 PCSK9 表达的影响25-26
• 3.11 荧光标记的 siRNA （cy3-siRNA） 转染的结果鉴定26-27
• 3.12 PCSK9 siRNA 对 PC12 细胞 PCSK9 表达的影响27
• 3.13 PCSK9 siRNA 对 oxLDL 诱导的 PC12 细胞凋亡的影响27-29
• 3.14 PCSK9 siRNA 对 oxLDL 处理的 PC12 细胞凋亡相关蛋白表达的影响29-30
• 3.15 oxLDL 对 PC12 细胞 BACE1 表达的影响30-31
• 3.16 oxLDL 对 PC12 细胞分泌 Aβ的影响31-32
• 3.17 PCSK9 siRNA 对 oxLDL 处理的 PC12 细胞 PCSK9 及 BACE1 表达的影响32
• 3.18 PCSK9 siRNA 对 oxLDL 处理的 PC12 细胞分泌 Aβ的影响32-34
• 讨论34-38
• 结论38-39
• 参考文献39-43
• 主要英文缩略语索引43-44
• 综述44-54
• References50-54
• 附件54-56
• 基金资助56-57
• 硕士期间发表论文57-58
• 致谢58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 刘录山;谢闵;姜志胜;杨琼;潘利红;武春艳;唐志晗;唐朝克;危当恒;王佐;;pcsk9 siRNA对oxLDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡的影响[J];生物化学与生物物理进展;2009年03期

本文编号：593783