SH-SY5Y神经细胞中α7神经型尼古丁受体基因沉默对CaM、CaMKⅡ蛋白水平的影响

发布时间：2017-07-30 10:05

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【摘要】：目的构建稳定的α7 n AChR沉默的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞,研究α7神经型尼古丁受体(n AChR)基因沉默对钙调蛋白(Ca M)、钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)水平的影响,了解α7 n AChR神经保护作用及其与阿尔茨海默病(AD)发病机制的关系。方法将α7 n AChR shRNA重组质转染到SH-SY5Y,用含嘌呤霉素的培养液筛选,挑选阳性克隆后采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹方法(Western-blot)检测细胞中α7n AChR mRNA及蛋白表达水平的变化;Western-blot方法测定Ca M、Ca MKⅡ蛋白表达水平。结果获得稳定转染α7 n AChR shRNA重组质粒的细胞克隆株,与对照组相比,α7 n AChR mRNA及蛋白表达量分别减少了95%和80%。Ca M、Ca MKⅡ蛋白表达量分别减少了48.5%和35%。结论成功构建了α7 n AChR mRNA沉默的SH-SY5Y细胞细胞株,α7 n AChR沉默降低了Ca M、Ca MKⅡ的蛋白水平,可能影响信号通路转导,这可能与阿尔茨海默病(AD)的发病有一定的关系。
【作者单位】： 贵州医科大学分子生物学重点实验室;贵州医科大学病理学教研室;
【关键词】： RNA干扰 α神经型尼古丁受体 CaM CaMKⅡ SH-SYY细胞
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81360178) 教育部“长江学者和创新团队发展计划资助”(IRT13058) 贵州省科技厅重大专项(黔科合重大专项字2014[6008]),贵州省科技厅项目(201344,黔科合SY字[2013]3020)
【分类号】：R749.16
【正文快照】： 阿尔茨海默病(AD)是一种老年人最常见的中枢神经系统退行性疾病,从中年期到晚年期缓慢发生的记忆损伤和认知功能障碍[1,2]。胆碱能系统功能障碍是早期AD较突出的基本特征,在AD发生中具有显著作用[3]。神经型尼古丁受体又称烟碱乙酰胆碱受体(Neuronal acetylcholine receptors,

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本文编号：593640