养血清脑颗粒改善血管性痴呆大鼠认知功能障碍的机制研究

发布时间：2017-08-10 08:17

  本文关键词：养血清脑颗粒改善血管性痴呆大鼠认知功能障碍的机制研究

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【摘要】：目的:近年来,痴呆症逐渐成为全球的主要威胁之一。血管性痴呆(Vascular dementia,VD)是继阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)之后第二位最常见的痴呆病因,目前有临床研究证实养血清脑颗粒可改善VD患者的认知功能,然而,相关的作用机制探索中对神经细胞自噬及其信号转导通路的调控关注甚少。本实验通过干预双侧颈总动脉永久性结扎制作VD大鼠模型,观察VD大鼠术后应用养血清脑颗粒治疗对认知功能的改善作用,并进一步探讨其是否与JNK/Bcl-2通路介导的神经细胞自噬有关。方法:3月龄250-300g雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠为研究对象,采用双侧颈总动脉结扎(bilateral carotid artery ligation,2-VO)的方法建立VD大鼠模型。实验随机分为4组,即假手术组(Sham+Saline)、模型组(2VO+Saline)、养血清脑低剂量治疗组(2VO+CG0.4)、养血清脑高剂量治疗组(2VO+CG0.8),术后连续灌胃给药28天,日一次,假手术组及模型组给予适量的生理盐水灌胃。连续给药28天后进行行为学测试,包括定位航行实验和空间探索实验,观察各组大鼠空间认知能力的变化。水迷宫测试结束后,采用尼氏染色观察各组大鼠海马组织病理学变化。丙二醛(Malondialdehyde,MDA)测试盒及总超氧化物歧化酶(Total superoxide dismutase,T-SOD)测试盒检测各组大鼠海马组织MDA含量及SOD活性。应用Western blot检测各组大鼠海马组织中JNK、p-JNK、p-bcl-2及自噬相关因子Beclin 1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62蛋白的表达,免疫组织化学方法观察海马CA1区神经元Beclin 1和p62阳性细胞数量的变化。结果:1水迷宫结果1.1定位航行实验各组大鼠的逃避潜伏期(即入水到找到平台的时间)随训练天数逐渐缩短。第1天,各组大鼠的逃避潜伏期无统计学差异(P0.05),第2至5天,模型组大鼠较假手术组大鼠的逃避潜伏期明显延长(P0.01)。与模型组大鼠相比,养血清脑治疗组大鼠的逃避潜伏期均明显缩短(第3天P0.05,其余P0.01)。1.2空间探索实验与假手术组大鼠相比,模型组大鼠在目标象限(即原平台所在象限)停留时间百分比比值偏低(P0.01),而养血清脑治疗组大鼠在目标象限停留时间百分比较模型组大鼠明显增加(P0.05),且高剂量治疗组大鼠在目标象限停留时间百分比比值高于低剂量治疗组大鼠(P0.05)。2尼氏染色结果假手术组大鼠海马CA1区神经元结构完整且排列紧密,胞浆清亮,细胞核清晰可见。与假手术组大鼠相比,模型组大鼠海马CA1区神经元排列疏松,有缺失现象,部分神经元可见胞体及胞核固缩。养血清脑颗粒治疗组大鼠海马CA1区神经元缺失有所减少,仍存在胞核固缩现象。3 MDA含量及SOD活性检测结果与假手术组大鼠相比,模型组大鼠MDA含量显著增加(P0.01),养血清脑治疗组大鼠较模型组大鼠MDA含量有所下降(P0.01),高剂量治疗组大鼠MDA含量低于低剂量治疗组(P0.01)。与假手术组大鼠相比,模型组大鼠SOD活性显著降低(P0.01),养血清脑治疗组大鼠较模型组大鼠SOD的活性有所增高(P0.01),高剂量治疗组较低剂量治疗组大鼠SOD活性更高(P0.01)。4 Western blot结果4.1 VD大鼠海马组织中JNK、p-JNK、p-bcl-2、Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的表达:与假手术组大鼠相比,模型组大鼠海马组织JNK蛋白表达未见明显差异,p-JNK、p-bcl-2及Beclin 1蛋白表达水平明显增加,LC3-II/I比值升高,p62蛋白表达显著下降,均具有统计学意义(P0.01)。4.2养血清脑颗粒对VD大鼠海马组织JNK、p-JNK、p-bcl-2、Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的影响:养血清脑治疗组大鼠与模型组大鼠相比,JNK蛋白表达未见明显差异,p-JNK蛋白表达水平下降,且p-bcl-2、Beclin 1蛋白表达明显减少,LC3-II/I比值下降,p62蛋白表达显著增加,高剂量治疗组大鼠较低剂量治疗组大鼠变化更明显(P0.01)。5免疫组织化学结果5.1 Beclin 1阳性细胞计数统计结果:Beclin 1阳性细胞呈棕黄色,于细胞浆表达。与假手术组大鼠相比,模型组大鼠海马CA1区阳性细胞数明显增多(P0.01),养血清脑治疗组大鼠较模型组大鼠海马CA1区阳性细胞数减少(P0.01)。5.2 p62阳性细胞计数统计结果:p62阳性细胞呈棕黄色,于细胞浆表达。与假手术组大鼠相比,模型组大鼠海马CA1区阳性细胞数明显偏少(P0.01),养血清脑颗粒治疗组大鼠较模型组大鼠海马CA1区阳性细胞数增多(P0.05)。结论:养血清脑颗粒可以作为抗氧化剂减轻VD大鼠海马区氧化损伤,改善慢性脑灌注不足所致的认知功能障碍。细胞自噬过度激活在VD发病过程中起重要作用。养血清脑颗粒可以改善VD大鼠的空间学习记忆损害及海马区病理损伤,通过调控JNK/Bcl-2通路抑制海马区神经细胞自噬可能是其作用机制之一。
【关键词】：血管性痴呆 认知功能障碍 慢性脑供血不足 养血清脑颗粒 自噬 JNK/Bcl-2通路
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.13
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 英文缩写12-13
• 引言13-15
• 第一部分 养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠认知功能的影响15-27
• 前言15-16
• 材料与方法16-19
• 结果19-20
• 附图20-22
• 附表22-23
• 讨论23-24
• 小结24-25
• 参考文献25-27
• 第二部分 养血清脑颗粒在血管性痴呆大鼠海马组织氧化应激损伤中的作用27-44
• 前言27-28
• 材料与方法28-34
• 结果34-35
• 附图35-37
• 附表37-38
• 讨论38-40
• 小结40-41
• 参考文献41-44
• 第三部分 血管性痴呆大鼠海马组织自噬相关蛋白的表达及养血清脑颗粒的影响44-67
• 前言44-45
• 材料与方法45-53
• 结果53-54
• 附图54-59
• 附表59-60
• 讨论60-63
• 小结63-64
• 参考文献64-67
• 结论67-68
• 综述 认知功能障碍相关的自噬信号及其转导通路研究68-77
• 参考文献73-77
• 致谢77-78
• 个人简历78

【参考文献】

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本文编号：649668