氯胺酮对培养海马神经元microRNA-206和BDNF表达影响的实验研究

发布时间：2017-08-20 16:32

  本文关键词：氯胺酮对培养海马神经元microRNA-206和BDNF表达影响的实验研究

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【摘要】：背景与目的：近年研究报道氯胺酮具有明显的抗抑郁样作用，且发现氯胺酮诱发脑源性神经营养因子(Brain-derivedneurotrophic factor，BDNF)表达是其抗抑郁作用的机制之一，然而氯胺酮是通过什么途径诱发BDNF表达目前仍不清楚；近年研究发现microRNAs（miRNAs）可与目标mRNA的3’-非编码区结合通过降解或抑制mRNA翻译达到对它们的靶目标mRNA的负反馈调控作用,因此miRNAs涉及几乎所有主要细胞功能活动，包括正常发育、生理以及疾病，，氯胺酮诱导BDNF表达是否与miRNA调控有关不清楚。计算机分析及其他相关研究发现miRNA-206（miR-206）可明显调控BDNF蛋白质表达，且前期我们用miRNA芯片以及动物实验检测发现氯胺酮可致大鼠脑海马组织miR-206表达明显下调而BDNF表达明显增加；因此本研究的主要目的是：拟从细胞水平进一步验证不同浓度氯胺酮对鼠海马神经元miR-206和BDNF表达的影响。方法:分离新生SD大鼠海马并行海马神经元的原代培养，将培养7天的海马神经元随机分为正常对照、50、100和300μM氯胺酮四组，50、100和300μM氯胺酮组在培养基中分别加入终浓度为50、100和300μM的氯胺酮，各组神经元继续分别培养0.5、1、3、6、12h后提取RNA；不同浓度氯胺酮处理6h后换为正常培养液继续培养24、48h后提取蛋白质；分别用qRT-PCR和WesternBlot检测各组各时间点神经元miR-206、BDNF mRNA及BDNF蛋白质表达含量变化；每组每个时间点重复3次。结果：（1）正常对照或300μM氯胺酮组组内及组间各时间点miR-206、BDNF mRNA相对表达量均无统计学差异（P0.05）；（2）50或100μM氯胺酮组组内各时间点miR-206和BDNF mRNA相对表达量存在统计学差异（P0.05），进一步S-N-K法分析发现: miR-206相对表达量在1,3,6，12h时间点逐渐降低（P0.05），而BDNF mRNA相对表达量在3、6、12h时间点明显升高（P0.05）；（3）50和100μM氯胺酮组组间各时间点miR-206和BDNF mRNA相对表达量无明显统计学差异（P0.05）；（4）四组在24和48h时BDNF蛋白质相对表达量存在统计学差异（P0.05），进一步S-N-K法分析发现50或100μM氯胺酮组BDNF蛋白质相对表达量均明显高于相应正常对照组（P0.05）。结论:1.50或100μM氯胺酮可致海马神经元miR-206表达降低和BDNF mRNA表达升高，峰值在氯胺酮处理后6至12h，且miR-206和BDNF mRNA表达在50和100μM氯胺酮组间无差异。2.50或100μM氯胺酮可致培养海马神经元BDNF蛋白质表达明显增加。
【关键词】：氯胺酮 海马神经元 miRNA-206 BDNF
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.4
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-10
• 材料与方法10-23
• 结果23-30
• 讨论30-35
• 结论35-36
• 参考文献36-40
• 英汉缩略词对照表40-41
• 致谢41-42
• 综述42-53
• 参考文献48-53

【参考文献】

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1 黄立宁;氯胺酮对发育期海马神经元凋亡的影响及机制研究[D];河北医科大学;2012年

本文编号：707716