HIF-1α与Notch-1信号转导通路的相互作用在AD发病中的机制研究

发布时间：2017-08-27 21:22

  本文关键词：HIF-1α与Notch-1信号转导通路的相互作用在AD发病中的机制研究

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【摘要】：目的：本研究旨在应用ADDLs对原代培养小鼠皮层神经元及星形胶质细胞混合体系进行干预作为体外AD模型,进而探讨缺氧诱导因子-1α与Notch-1信号通路的相互作用在阿尔茨海默病(AD)的发病中可能发挥的作用。 方法：本研究应用Aβ寡聚体(ADDLs)对体外培养小鼠皮层神经元与星形胶质细胞混合培养体系进行干预以模拟体外AD模型。采用细胞免疫荧光的方法鉴定混合体系中神经元及星形胶质细胞中HIF-1α及Notch-1蛋白表达的情况；应用HIF-1αa诱导剂DMOG. HIF-1α抑制剂YC-1及Notch-1信号通路阻断剂(γ-分泌酶抑制剂)DAPT对体外AD模型进行干预；应用CCK-8法对各种条件下体外培养小鼠皮层神经元与星形胶质细胞混合体系的细胞活力进行检测；应用Western Blot法对不同条件下混合体系的HIF-1α水平、NICD (Notch-1intracellular domain, Notch-1胞内段)水平进行检测,采用荧光实时定量PCR法对不同条件下混合体系中凋亡相关蛋白caspase-3的mRNA水平进行检测。 结果：首先HIF-1α在原代培养混合体系的部分神经元和部分星形胶质细胞中存在表达,而Notch-1则主要在大部分星形胶质细胞中存在表达,皮层神经元中未发现明确表达；其次,CCK-8实验显示,相对低浓度的ADDLs对原代培养小鼠皮层神经元及星形胶质细胞混合体系的细胞活力无显著影响,但ADDLs在较高浓度情况下对原代培养混合体系的细胞活力则表现出明显的毒性作用,并且呈现时间和浓度依赖性。伴随着这种毒性作用,ADDLs的干预使得原代培养混合体系的HIF-1α及NICD水平均呈现出先升高后减低的类似变化趋势。针对以上毒性作用,YC-1及DAPT在4小时点对原代培养混合体系的细胞活力表现出明显的保护作用,并且可以明显抑制ADDLs所诱导原代培养混合体系中凋亡相关蛋白caspase-3mRNA的表达水平,同时YC-1及DAPT显著抑制了ADDLs诱导的原代培养混合体系中HIF-1α及NICD水平的上调。YC-1及DAPT在24小时点对原代培养混合体系的细胞活力、HIF-1α及NICD水平的影响不明显。 结论：Aβ寡聚体(ADDLs)的毒性作用和HIF-1α及NICD水平的一过性上调有关,同时HIF-1α和Notch-1信号通路的相互作用与ADDLs的毒性作用有密切关系：YC-1及DAPT均可拮抗ADDLs的毒性作用及凋亡诱导作用,这些保护作用可能与调节HIF-1α及Notch-1信号通路的相互作用密切相关。
【关键词】：阿尔茨海默病 缺氧诱导因子-1α Notch-1信号通路 NICD 相互作用
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 研究背景6-14
• 参考文献9-14
• 中文摘要14-16
• ABSTRACT16-18
• 第一部分 ADDLs对原代培养小鼠皮层神经元及星形胶质细胞混合体系细胞活力及HIF-1α、NICD水平的影响18-43
• 摘要18-19
• ABSTRACT19-21
• 材料和方法21-33
• 结果33-38
• 讨论38-40
• 参考文献40-43
• 第二部分 YC-1对体外AD模型的保护作用及HIF-1α、NICD蛋白水平的影响43-63
• 摘要43
• Abstract43-45
• 材料和方法45-55
• 结果55-58
• 讨论58-61
• 参考文献61-63
• 第三部分 DAPT对体外AD模型的保护作用及HIF-1α、NICD蛋白水平的影响63-83
• 摘要63
• Abstract63-65
• 材料和方法65-75
• 结果75-79
• 讨论79-80
• 参考文献80-83
• 全文小结83-84
• 综述84-99
• 参考文献90-99
• 附件 攻读学位期间发表论文及参与课题情况99-101
• 英文缩略词表101-102
• 致谢102

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 赵焕新;李晓宇;姚红;武烨;杨蓉;赵荣瑞;刘慧荣;;低氧后处理诱导的低氧诱导因子-1α表达上调减轻H9c2心肌细胞低氧/复氧损伤[J];生理学报;2013年03期

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本文编号：745938