自噬在慢性不可预知应激损害大鼠学习记忆功能中的作用

发布时间：2017-08-28 20:18

  本文关键词：自噬在慢性不可预知应激损害大鼠学习记忆功能中的作用

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【摘要】：目的:1.观察慢性不可预知温和应激对大鼠学习记忆功能影响和海马CA1区自噬的作用。2.观察自噬改变对慢性不可预知温和应激大鼠学习记忆功能的影响。方法:48只健康雄性SD大鼠随机分为四组,正常对照组(Control组)、生理盐水+慢性不可预知温和应激组(CUMS组)、氯喹(Chloroquine,CQ)+慢性不可预知温和应激组(CQ组)、雷帕霉素(Rapamycin)+慢性不可预知温和应激组(Rapa组),每组大鼠各12只.除Control组外,各组大鼠第一天起予以慢性应激处理,CUMS组予以每天侧脑室注射2ul无菌生理盐水,CQ组侧脑室注射2ul的氯喹(0.61mg/kg),Rapa组侧脑室注射2ul的雷帕霉素(35pmol/l)。实验期间各组大鼠每周进行一次糖水偏嗜实验,第六周行Morris水迷宫实验后,分批处死动物,取海马CA1区行TUNEL染色观测凋亡、透射电镜观测自噬体的形成、HE染色观测形态学变化,Western-Blot法检测自噬有关蛋白Beclin-1、LC3-II/LC3-I表达、免疫荧光法检测p62蛋白的表达。结果:1.糖水偏嗜值测定:实验前2周除Control组外其他各组糖水偏嗜值轻微下降,但各组之间无差异(P0.05),应激3周后,CUMS组大鼠糖水偏嗜值下降且低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);CQ组糖水偏嗜值较CUMS组有下降,差异有统计学意义(P0.05);Rapa组糖水偏嗜值稍高于CUMS组,差异有统计学意义(P0.05)。2.Western-Blot检测示:CUMS组LC3-II/LC3-I比值及Beclin-1的表达高于Control组,差异有统计学意义(P0.05);与CUMS组比,CQ组LC3-II/LC3-I表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。Rapa组LC3-II/LC3-I比值高于CUMS组,差异有统计学意义(P0.05)。CUMS组、CQ组及Rapa组Beclin-1表达差异无统计学意义(P0.05)。3.免疫荧光:CUMS组海马CA1区p62蛋白的荧光强度较Control组增高,CQ组荧光强度较CUMS组增高更为明显,Rapa组较CUMS组荧光强度下降。4.HE染色、透射电镜:Control组大鼠海马CA1区神经元细胞排列十分整齐,约3-5层,细胞层次清晰,细胞质均匀红染,胞核清晰可见;CUMS组大鼠海马CA1区神经元细胞较对照组细胞数目减少、排列明显稀疏,约1-3层,层次结构混乱,可见部分神经元轮廓消失,细胞质与胞核的界限模糊,体积缩小,部分细胞质深染、可见少许胞核固缩;Rapa组较Control组神经元细胞数目略有减少、排列稀疏、层次稍感混乱、胞质基本均匀、未见明显核固缩;CQ组部分海马CA1区神经元细胞层次排列明显混乱、胞质深染、边集,可见明显的核固缩。电镜示:较Control组CUMS组核膜呈皱缩改变,核染色质边集、自噬小体增多,CQ组自噬小体、空泡化线粒体明显多于CUMS组,Rapa组破坏的线粒体及自噬小体较CUMS组减少。5.TUNEL染色:Control组可见少量细胞胞核被染成棕黄色;CUMS组棕黄色较Control组有增多,说明凋亡细胞较Control组有增多;CQ组海马CA1区出现了大量凋亡细胞。Rapa组海马CA1区凋亡细胞较CUMS组明显减少。6.行为学检测:Morris水迷宫实验中CUMS组大鼠逃避潜伏期较Control组延长,进入目标象限次数及滞留时间减少,差异有统计学意义(P0.05)。CQ组较CUMS组逃避潜伏期延长、进入目标象限次数、目标象限滞留时间减少,差异有统计学意义(P0.05)。Rapa组逃避潜伏期小于CUMS组,进入目标象限次数、目标象限滞留时间大于CUMS(P0.05)。结论:1.慢性应激损害大鼠海马神经元自噬流导致其学习记忆功能损害。2.激活自噬可以改善慢性温和应激诱导的大鼠学习记忆功能障碍,抑制自噬则加重其损害。
【关键词】：自噬 认知功能障碍 慢性不可预知温和应激 雷帕霉素
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.5
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 第1章 绪论12-14
• 第2章 实验材料与方法14-26
• 第3章 实验结果26-36
• 第4章 讨论36-42
• 第5章 结论42-44
• 参考文献44-50
• 综述50-60
• 参考文献56-60
• 作者攻读学位期间所获科研成果60-62
• 致谢62

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