维生素D抗小鼠抑郁作用的初步研究

发布时间：2017-08-31 05:12

  本文关键词：维生素D抗小鼠抑郁作用的初步研究

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【摘要】：目的：观察补充维生素D对抑郁症模型小鼠抑郁样表现是否具有治疗作用并探究其作用机制。 方法：分为三个部分，一、维生素D对小鼠抑郁样表现治疗作用研究；二、维生素D对小鼠抑郁样表现治疗的机制研究；三、活性维生素D（1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25(OH)2D3）对谷氨酸诱导的小鼠海马神经元凋亡抑制作用研究。（1）采用慢性不可预见性温和刺激应激动物模型（Chronic Unpredictable MildStress，CUMS）方法建立抑郁症小鼠模型，采用冰水游泳5min、45℃高温5min、夹尾1min、行为限制2h、禁食24h、禁水24h、潮湿垫料10h、鼠笼倾斜45°24h、昼夜颠倒24h、空瓶放置2h等10种刺激，将雄性ICR小鼠随机分为对照组与Stress组，Stress组每天随机不重复给以2-3种刺激，持续4周，结束后观察小鼠状态、悬尾实验（tail suspension test, TST）与强迫游泳实验（forced swimming test,FST）静止时间及小鼠体重和一般性状来判断小鼠是否出现抑郁样表现；对于Ahi1基因敲除（Ahi1knockout, Ahi1KO）鼠（详见附录一），直接检测其与野生型小鼠悬尾实验与强迫游泳实验静止时间来判断小鼠是否出现抑郁样表现。ELISA法检测小鼠海马匀浆中脑源性神经营养因子（brain derived neurophic factor，BDNF）表达量；（2）按照CUMS方法建立抑郁小鼠模型，模型组ICR小鼠分为：空白对照+Vehicle组、Stress+Vehicle组、Stress+维生素D3组、Stress+丙咪嗪（20mg/kg/d）组，将Ahi1KO鼠分为两组：Vehicle组与维生素D3组，给药治疗4周后检测各组小鼠行为学；眼球取血测量血清维生素D(25-hydroxyvitamin D3,25(OH)D3)水平，取脑后分离海马与脑干，Western Blot检测海马中BDNF的表达，高效液相色谱法检测脑组织中神经递质五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)与多巴胺（Dopamine,DA）的含量，，RT-PCR检测海马中CYP24A1、CYP27B1、VDR、BDNF mRNA水平；（3）采用谷氨酸诱导神经细胞凋亡模型，细胞分为对照组、1,25(OH)2D3组、谷氨酸组与谷氨酸/1,25(OH)2D3联合作用组。CCK-8测定细胞存活率，流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡和细胞活性氧（reactive oxidative species，ROS）水平。 结果：（1）4周建模后，Stress组小鼠悬尾实验与强迫游泳实验的静止时间显著长于对照组，体重增长明显小于对照组（P0.05）；Ahi1KO鼠在悬尾实验与强迫游泳实验中的静止时间显著长于野生型小鼠，海马组织中BDNF表达量明显低于野生型小鼠（P0.05）；给予维生素D3与抗抑郁药治疗后，CUMS模型小鼠与Ahi1KO鼠悬尾实验与强迫游泳实验的静止时间明显减少（P0.05）,抑郁样表现得到改善，提示维生素D3对小鼠抑郁样表现具有治疗作用；（2）维生素D3治疗后，小鼠海马组织中BDNF表达量升高，5-HT与DA表达量降低，RT-PCR结果显示相对于野生型小鼠，Ahi1KO鼠CYP27B1、VDR mRNA水平升高，CYP24A1、BDNF mRNA水平降低，维生素D3治疗后CYP27B1、VDR、BDNF mRNA水平降低，CYP24A1mRNA表达水平升高，差异均有统计学意义，提示维生素D3可能通过调控Vitamin D-VDR通路来提高BDNF表达，对抑郁症起到治疗作用；（3）1,25(OH)2D3预处理HT-22细胞可以有效提高谷氨酸作用后的细胞存活率。细胞周期显示1,25(OH)2D3可以明显减小谷氨酸作用后HT-22细胞的G0/G1期细胞比例，增加S期与G2/M期细胞比例。相对于谷氨酸组，谷氨酸/1,25(OH)2D3联合作用组细胞晚期凋亡率均有降低，随1,25(OH)2D3浓度增加凋亡率逐步降低。相对于对照组，各处理组均可以使细胞ROS释放增多（P0.05），而相对于单纯使用谷氨酸组，谷氨酸/1,25(OH)2D3联合应用组细胞ROS水平也有明显升高，但随着1,25(OH)2D3浓度增加细胞中ROS水平逐步降低（P0.05）。 结论： 1.维生素D干预可以改善CUMS抑郁模型鼠和Ahi1基因敲除鼠抑郁样表现； 2.维生素D可以抑制谷氨酸诱导的海马神经元凋亡； 3.维生素D对抑郁症治疗作用的实现可能通过激活Vitamin D-VDR信号通路提高脑组织中脑源性神经营养因子BDNF表达水平和抑制海马神经元凋亡来共同发挥作用，这提示维生素D可能成为抑郁症的廉价预防措施和辅助治疗措施。
【关键词】：抑郁症 维生素D 脑源性神经营养因子 神经凋亡
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.4
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-12
• 第一部分 维生素 D 对小鼠抑郁样表现治疗作用研究12-22
• 1 材料与方法12-16
• 2 结果16-20
• 3 讨论20-22
• 第二部分 维生素 D 对小鼠抑郁样表现治疗作用的机制研究22-36
• 1 材料与方法22-29
• 2 结果29-33
• 3 讨论33-36
• 第三部分 1,25(OH)_2D_3对谷氨酸诱导 HT-22 细胞损伤保护作用研究36-44
• 1 材料和方法36-38
• 2 结果38-41
• 3 讨论41-44
• 结论44-45
• 参考文献45-53
• 综述 维生素 D 神经保护作用研究现状53-64
• 参考文献57-64
• 附录一 AHI1 基因敲除鼠64-70
• 附录二 维生素 D 安全剂量评价70-74
• 中英文缩写词对照表74-75
• 研究生期间发表文章75-76
• 致谢76-77

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本文编号：763639