MiR-181a对PTZ致痫大鼠认知功能影响的研究

发布时间：2017-09-19 10:27

  本文关键词：MiR-181a对PTZ致痫大鼠认知功能影响的研究

  更多相关文章： 癫痫 miR-181a 认知功能 Bcl-2

【摘要】：[目的]近年来microRNA调控备受关注,越来越多的研究证实miRNAs在中枢神经系统发育和神经元分化过程扮演着重要角色。目前已经发现miRNAs与癫痫及癫痫的认知障碍密切相关,初步研究显示PTZ(pentylenetetrazol,戊四氮)致痫大鼠记忆障碍组miR-181a表达明显上调,但是miR-181a是如何影响PTZ致痫大鼠的认知功能目前尚不清楚。基于以上研究背景,我们设计以下实验对miR-181a可能的生物学机制进行初步探讨。[方法]采用SD雄性大鼠,通过PTZ腹腔注射(60mg/kg)建立癫痫模型,随机分为癫痫对照组、干预对照组、miR-181a激动剂干预组,另设正常对照组,每组各12只。28天后进行Morris水迷宫实验,然后处死大鼠取海马组织,检测海马组织中miR-181a的表达、海马神经元凋亡情况。[结果](1)认知行为学研究：定位航行实验中,随着训练天数的增加,各组的逃避潜伏期逐渐缩短。]miR-181a激动剂干预组在各个时间点均高于其余组,正常对照组在各个时间点均低于其余各组。在试验第5天,与正常对照组比较,癫痫对照组潜伏期明显延长,P0.05,具有统计学意义。癫痫对照组与干预对照组潜伏期无明显差异(P0.05)。miR-181a激动剂干预组的潜伏期明显高于癫痫对照组(P0.05)。miR-181a激动剂干预组与干预对照组相比无明显差异(P0.05)。第6天撤掉平台进行空间探索实验,与正常对照组比较,癫痫对照组的穿越平台次数明显减少。癫痫对照组、干预对照组和miR-181a激动剂干预组的穿越平台次数差异无统计学意义(P0.05)。正常对照组在目标象限的运动时间比明显高于癫痫对照组(P0.05)。与干预对照组比较,miR-181a激动剂干预组在目标象限的运动时间比显著减少(P0.05)。(2) miR-181a agomir干预前后miR-181a基因表达：与正常对照组比较,癫痫对照组miR-181a表达明显上调(P0.05),具有统计学意义。与干预对照组比较,miR-181a激动剂干预组表达上调明显,具有统计学意义(P0.05)。(3) miR-181a agomir干预前后海马神经元凋亡研究：通过TUNEL检测发现与正常对照组比较,癫痫对照组凋亡细胞增加,P0.05,具有统计学意义。癫痫对照组和干预对照组凋亡细胞无明显差异。与癫痫对照组比较,miR-181a激动剂干预组凋亡细胞增加12.83%,具有统计学意义。miR-181a激动剂干预组与干预对照组比较,凋亡细胞增加7.67%,差异不具有统计学意义(P0.05)。另外,采用Western blot检测细胞凋亡因子Bcl-2显示：与正常对照组比较,癫痫对照组Bcl-2蛋白表达明显减少,P0.05,差异具有统计学差异。miR-181a激动剂干预组Bcl-2蛋白表达量较干预对照组减少38.88%,差异具有统计学意义[结论](1) MiR-181a对PTZ致痫大鼠的认知功能具有负向调控作用。(2) MiR-181a明显减少Bcl-2蛋白表达,显著增加海马神经元凋亡,这可能是miR-181a引起致痫大鼠认知损害的机制。
【关键词】：癫痫 miR-181a 认知功能 Bcl-2
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.1;R742.1
【目录】：

• 个人简历3-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 一. PTZ致痫大鼠模型建立及miR-181a agomir干预15-17
• 1 实验材料15-16
• 1.1 实验动物15
• 1.2 主要的实验设备15
• 1.3 主要试剂15
• 1.4 溶液的配制15-16
• 2 实验方法16-17
• 2.1 PTZ致痫模型建立及给药16
• 2.2 miR-181a agomir干预16-17
• 二. miR-181a agomir干预前后癫痫大鼠认知功能变化的研究17-20
• 1 实验目的17
• 2 实验材料17
• 3 实验方法17-18
• 4 统计学分析18
• 5 实验结果18-20
• 三. miR-181a agomir干预前后癫痫大鼠miR-181a表达变化的研究20-26
• 1 实验目的20
• 2 实验材料20-21
• 2.1 主要的实验设备20
• 2.2 主要试剂20-21
• 3 实验方法21-24
• 3.1 直接断头取脑组织21
• 3.2 荧光定量PCR技术21-24
• 3.2.1 海马组织总RNA提取21-22
• 3.2.2 海马组织总RNA浓度测定22
• 3.2.3 海马组织cDNA合成22
• 3.2.4 引物设计与合成22-23
• 3.2.5 RT-PCR反应23-24
• 4 统计学分析24
• 5 实验结果24-26
• 四. miR-181a agomir干预前后癫痫大鼠海马凋亡变化的研究26-36
• 1 实验目的26
• 2 实验材料26-29
• 2.1 主要的实验设备26-27
• 2.2 主要试剂27-28
• 2.3 溶液的配制28-29
• 3 实验方法29-33
• 3.1 原位凋亡检测29-31
• 3.1.1 组织石蜡包埋29-30
• 3.1.2 原位凋亡检测30-31
• 3.2 Western blot检测Bcl-2表达31-33
• 3.2.1 海马组织总蛋白提取及浓度测定31
• 3.2.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳31-32
• 3.2.3 转膜32-33
• 3.2.4 抗原抗体反应33
• 4 统计学分析33-34
• 5 实验结果34-36
• 5.1 原位凋亡检测结果34-36
• 5.2 Western Blotting结果36
• 讨论36-39
• 结论39
• 参考文献39-43
• 中英文对照缩写43-44
• 综述44-57
• 参考文献50-57
• 致谢57-58
• 攻读学位期间发表的学术论文58

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本文编号：881108