艾司西酞普兰在阿尔茨海默病样tau蛋白过度磷酸化中的保护作用及其机制

发布时间：2017-09-20 07:11

  本文关键词：艾司西酞普兰在阿尔茨海默病样tau蛋白过度磷酸化中的保护作用及其机制

  更多相关文章： tau蛋白磷酸化 SSRI类抗抑郁剂 GSK-3β SSRI类抗抑郁剂 记忆功能 tau蛋白磷酸化 SSRI类抗抑郁剂 认知功能 tau蛋白磷酸化 转基因小鼠 tau蛋白磷酸化 SSRI类抗抑郁剂 GSK-3β 5-HT1A受体 海马神经元

【摘要】：第一部分艾司西酞普兰对HEK293/tau441细胞中forskolin诱导的tau蛋白过度磷酸化的影响背景：超过60%的阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)患者具有抑郁的症状。老年期抑郁也是AD发病的高危因素。抗抑郁药物也临床应用于AD患者并发的抑郁症状用药。SSRI类抗抑郁剂能否改善AD患者认知功能,延缓AD病程,尚不得而知。抗抑郁药对阿尔茨海默病的重要病理表现之一,即tau蛋白的过度磷酸化的影响目前仍不明确,尚未有研究报道其可能机制,因此本研究从细胞层面探讨SSRI类抗抑郁剂对tau蛋白过度磷酸化的影响及其机制。方法：选择转染了人类最长tau异构体(tau441)的HEK293细胞(HEK293/tau441)为载体,使用蛋白激酶A (protein kinase A, PKA)的激活剂forskolin (4μM)处理细胞2 h,诱导细胞内tau蛋白过度磷酸化,同时使用不同浓度的艾司西酞普兰(0、5、10、20、40、80μM)作用细胞22 h,观察HEK293/tau441细胞内tau蛋白磷酸化水平,通过Western blot方法检测蛋白激酶和酯酶的活性位点含量。结果：艾司西酞普兰可剂量依赖性降低tau蛋白多个磷酸化位点(丝氨酸199、202、214、396)磷酸化水平,但不影响总tau蛋白的表达；不同浓度氟西汀也可浓度依赖性降低tau蛋白多个磷酸化位点磷酸化水平；然而右旋西酞普兰不能降低tau蛋白磷酸化水平；与单独艾司西酞普兰干预组相比,右旋西酞普兰与艾司西酞普兰合用部分增加了tau蛋白磷酸化水平；艾司西酞普兰增加了GSK-β在Ser9位点的磷酸化水平以及Akt在Ser473位点的磷酸化水平,而对PP2A在Tyr307位点的磷酸化水平没有影响；此外,5-HT1A受体激动剂8-OH-DPAT不能降低tau蛋白磷酸化水平。结论：SSRI类抗抑郁药物艾司西酞普兰可降低tau蛋白过度磷酸化,此作用可能是通过对GSK-3β活性调控、而非通过经典5-HT1A受体途径实现的,抗抑郁剂,至少是SSRI类抗抑郁剂有望成为预防或治疗AD的用药。第二部分艾司西酞普兰对PKA激活诱导的的大鼠记忆障碍及tau蛋白过度磷酸化的影响背景：临床研究发现SSRI抗抑郁药物可能改善AD患者的整体认知功能,少部分动物研究也发现了SSRI类抗抑郁药物能改善动物模型的认知障碍。PKA在调节tau蛋白的磷酸化中发挥着重要作用,本研究拟在动物整体水平探讨SSRI类抗抑郁剂对PKA激活诱导的记忆障碍及tau蛋白过度磷酸化的影响。方法：为了探究SSRI类抗抑郁剂艾司西酞普兰对侧脑室注射PKA的激动剂forskolin诱导的行为学改变的影响,本研究利用1norris水迷宫检测大鼠的学习和记忆能力,利用糖水消耗实验检测大鼠的抑郁样行为,利用旷野实验检测大鼠的焦虑样行为,采用Western blot方法检测大鼠海马中tau蛋白在不同位点的磷酸化水平,并检测tau蛋白磷酸化相关激酶和酯酶的水平,如GSK-3β、PP2A、Erk, MEK。结果：艾司西酞普兰能有效改善PKA激活所诱导的大鼠空间记忆功能障碍：PKA激活能诱导大鼠的焦虑样行为,而艾司西酞普兰不能改善大鼠的焦虑样行为；艾司西酞普兰显著减少PKA激活的大鼠海马组织中tau蛋白在多个位点的磷酸化水平；艾司西酞普兰增加PKA激活的大鼠海马组织中GSK-3β在Ser9位点的磷酸化水平以及Akt在Ser473位点的磷酸化水平：艾司西酞普兰对PKA激活的大鼠海马组织中PP2A、Erk以及MEK的磷酸化水平没有影响。结论：艾司西酞普兰对forskolin诱导的大鼠记忆功能具有改善作用,还能减少tau蛋白过度磷酸化,这些效应可能与Akt/GSK-3β信号通路有关。第三部分艾司西酞普兰对pR5 ta u转基因小鼠认知功能及tau蛋白磷酸化的影响背景：艾司西酞普兰是一种选择性5-HT再摄取抑制剂,临床上被广泛应用于抑郁症的治疗。本课题组在前期研究中发现艾司西酞普兰能够减少蛋白激酶A激活诱导的SD大鼠的空间记忆障碍以及tau蛋白过度磷酸化,本研究拟在聚集过度磷酸化tau蛋白的P301L转基因小鼠(pR5 tau转基因小鼠)体内进一步探究艾司西酞普兰是否仍具有改善记忆及减少tau蛋白过度磷酸化的作用。方法：选用pR5 tau转基因小鼠及同窝出生的野生型小鼠,分别腹腔注射艾司西酞普兰(10mg/kg)或生理盐水4周。利用morris水迷宫检测小鼠的学习和记忆能力,利用糖水消耗实验检测小鼠的抑郁样行为,利用旷野实验检测小鼠的焦虑样行为,行为学结束后分离小鼠海马,应用Western blot方法检测艾司西酞普兰对pR5 tau转基因小鼠海马中tau蛋白磷酸化水平以及磷酸化相关激酶的影响。结果：在Morris水迷宫实验中,野生型小鼠表现比注射生理盐水的pR5 tau转基因小鼠表现更好,而注射艾司西酞普兰能部分改善pR5 tau转基因小鼠的空间学习记忆能力；在糖水消耗实验及旷野实验中,各组小鼠表现没有明显差异性；小鼠海马Western blot结果显示：与野生型小鼠相比,注射生理盐水的pR5 tau转基因小鼠tau蛋白磷酸化程度明显增高,艾司西酞普兰能明显减少转基因小鼠的tau蛋白磷酸化水平；转基因小鼠海马中pSer9-GSK3β 和 pSer473-Akt的水平比野生型小鼠明显增高,艾司西酞普兰干预能逆转这两个蛋白的增高。结论：艾司西酞普兰对pR5-tau转基因小鼠具有改善认知的作用,不仅是潜在的治疗AD的药物,还可能用于其他tau蛋白过度磷酸化相关的神经退行性疾病中。第四部分艾司西酞普兰对大鼠原代海马神经元中Aβ1-42诱导的tau蛋白过度磷酸化的影响及机制背景：Tau蛋白的过度磷酸化是阿尔茨海默病中的重要病理改变,因此,调控tau蛋白的过度磷酸化水平可能是预防或治疗AD的可能方向。本研究旨在探讨SSRJ抗抑郁剂艾司西酞普兰对Aβ1-42诱导的大鼠原代海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响及相关内在机制。方法：提取大鼠海马神经元并进行体外培养；通过Western blot检测tau蛋白在不同位点的磷酸化水平并检测tau蛋白磷酸化相关激酶和酯酶的含量；通过免疫荧光染色观察艾司西酞普兰对神经元突起生长的影响。结果：艾司西酞普兰可剂量依赖性降低海马神经元中Aβ1-42诱导的tau蛋白在多个磷酸化位点的过度磷酸化；氟西汀也可降低Aβ1-42诱导的tau蛋白过度磷酸化,而艾司西酞普兰的同分异构体右旋西酞普兰不能降低tau蛋白的磷酸化水平；艾司西酞普兰能够激活Akt/GSK-3p信号通路；抑制PI3K能够阻断艾司西酞普兰减少Aβ1-42诱导的tau蛋白过度磷酸化的效应；5-HT1A受体的激动剂8-OH-DPAT也能激活Akt/GSK-3β信号通路并减少Aβ1-42诱导的tau蛋白过度磷酸化；而5-HT1A受体的拮抗剂WAY-100635能够明显阻断艾司西酞普兰对Akt/GSK-3p信号通路的激活效应,并明显减弱艾司西酞普兰减少Aβ1-42诱导的tau蛋白过度磷酸化的效应；艾司西酞普兰能明显改善Aβ1-42诱导的神经元突起生长及树突棘的密度并逆转Aβ1-42诱导的突触蛋白的水平改变。结论：SSRI类抗抑郁药剂艾司西酞普兰可通过调控5-HT1A受体介导的PI3K/Akt/GSK-3β信号通路而减少Aβ1-42诱导的大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化,具有一定的神经保护作用,艾司西酞普兰对tau蛋白过度磷酸化相关的疾病,包括阿尔茨海默病可能具有一定的治疗前景。
【关键词】：tau蛋白磷酸化 SSRI类抗抑郁剂 GSK-3β SSRI类抗抑郁剂 记忆功能 tau蛋白磷酸化 SSRI类抗抑郁剂 认知功能 tau蛋白磷酸化 转基因小鼠 tau蛋白磷酸化 SSRI类抗抑郁剂 GSK-3β 5-HT1A受体 海马神经元
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-16
• 本文所用缩略语注释表16-18
• 前言18-22
• 文献综述22-27
• 第一部分 艾司西酞普兰对HEK293/tau441细胞中forskolin诱导的tau蛋白过度磷酸化的影响27-44
• 1.1 研究背景27-28
• 1.2 试剂与器材28-33
• 1.3 主要实验方法33-36
• 1.4 结果36-40
• 1.5 讨论40-44
• 第二部分 艾司西酞普兰对PKA激活诱导的的大鼠记忆障碍及tau蛋白过度磷酸化的影响44-57
• 2.1 研究背景44
• 2.2 试剂与器材44-45
• 2.3 主要实验方法45-49
• 2.4 结果49-54
• 2.5 讨论54-57
• 第三部分 艾司西酞普兰对pR5 tau转基因小鼠认知功能及tau蛋白磷酸化的影响57-70
• 3.1 研究背景57
• 3.2 试剂与器材57-58
• 3.3 主要实验方法58-62
• 3.4 结果62-66
• 3.5 讨论66-70
• 第四部分 艾司西酞普兰对大鼠原代海马神经元中Aβ_(1-42)诱导的tau蛋白过度磷酸化的影响及机制70-89
• 4.1 研究背景70
• 4.2 试剂与器材70-72
• 4.3 主要实验方法72-76
• 4.4 结果76-85
• 4.5 讨论85-89
• 全文总结与展望89-90
• 参考文献90-99
• 作者简介99-101
• 致谢101

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 温晓雪 ,王林;艾司西酞普兰在欧洲获准用于治疗社交恐惧症[J];国外医学(药学分册);2004年03期

2 慈妍红,周德洁,田建明;西酞普兰片致癫痫1例[J];宁夏医学杂志;2004年06期

3 喻东山,余琳;西酞普兰的临床应用[J];神经疾病与精神卫生;2005年01期

4 李丽华;陈卫华;颜卫平;王小平;;西酞普兰治疗持续性躯体形式疼痛障碍对照研究[J];中国神经精神疾病杂志;2007年05期

5 张晓东;鲍晓丽;;艾司西酞普兰治疗持续的躯体形式疼痛障碍对照研究[J];中国社区医师(医学专业);2012年06期

6 刘振华;郝光涛;吴行伟;李海燕;张丽娟;高洪志;王晓芳;刘伟丽;刘泽源;;高效液相色谱串联质谱法测定人血浆中西酞普兰含量[J];武警医学;2012年04期

7 王润梅;马金萍;李俊福;施万平;;艾司西酞普兰对肝功能的影响[J];山西医药杂志(下半月刊);2012年06期

8 苏宝兰;;过量服用利培酮及西酞普兰1例[J];临床精神医学杂志;2012年04期

9 刘晓静;张艳;李翠鸾;王e，

本文编号：886624