低能量激光照射对受牵张力刺激的人牙周膜细胞成骨分化的影响

发布时间：2017-10-12 08:20

  本文关键词：低能量激光照射对受牵张力刺激的人牙周膜细胞成骨分化的影响

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【摘要】：目的:建立人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells h PDLCs)体外张应力加载模型,探讨弱激光照射(low level laser irradiation,LLLI)对受张应力刺激的h PDLCs成骨分化的影响,为揭示LLLI促进正畸牙移动的分子生物学机制奠定理论基础。方法:1、取临床健康青少年(12-16岁)因正畸治疗需要拔除的双尖牙根中1/3牙周膜组织,通过组织块结合酶消化法对h PDLCs进行原代分离培养,常规的换液、消化、传代,细胞呈贴壁生长状态。取第三代细胞用于细胞来源的鉴定,第四代细胞用于本实验中。2、人牙周膜细胞应力及激光加载实验:取第四代细胞常规复苏后,分为三组,即A组(空白组)、B组(张应力加载组)和C组(弱激光照射并张应力加载组),接种于6孔板中。A组细胞既不加力也不照射;B组细胞分别给予2h、6h、12h、24h的10%周期性张应力刺激;C组细胞先进行2s、5s激光照射,再分别进行2h、6h、12h、24h的周期性张应力加载。3、提取各组细胞的总RNA和总蛋白,通过实时荧光定量检测技术(q RT-PCR)和免疫印迹(Western Blotting)检测技术,对各组成骨分化指标ALP、Runx2、OCN进行基因及蛋白检测。4、应用SPSSl7.0医用统计软件包进行方差分析。实验所得数据以平均数±标准差(?x±s)表示。应用方差分析的统计方法,对A组、B组、C组各指标的m RNA和蛋白表达量差异进行统计学分析;使用LSD-t检验方法进行均数间的两两比较,以p0.05视为有统计学意义。结果:1、h PDLCs鉴定:镜下观察,细胞呈长梭形,排列成放射状或是漩涡状。细胞抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性,说明所得细胞为间充质来源。2、q RT-PCR检测结果显示:不同的加力时间段,不同的激光照射剂量条件下,ALP、Runx2、OCN的m RNA表达量A组、B组、C组任两组间比较差异有显著性(p0.05)。C1、C2组之间比较差异有统计学意义(p0.05),随加力时间延长,激光照射时间增加,m RNA的表达增强,差异有统计学意义(p0.05)。3、Western Blotting检测结果显示:ALP、Runx2、OCN的蛋白表达量随加力时间和激光照射时间增加而增加,各组之间差异有统计学意义(p0.05);C1、C2组蛋白表达量比较差异有统计学意义(p0.05)。A组、B组、C组蛋白表达量结果与m RNA表达趋势一致。结论:1、组织块联合酶消化法培养人牙周膜细胞,操作简单,培养成功率高,是一种可行的原代培养方法。2、弱激光照射能够加速并增强受周期性张应力刺激的人牙周膜细胞成骨分化指标ALP、Runx2、OCN的m RNA和蛋白表达。3、在一定剂量范围内,随着能量密度增加,LLLI促进受张应力刺激的人牙周膜细胞成骨分化的作用增强。
【关键词】：弱激光 牙周膜细胞 周期性张应力 牙移动
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R783.5
【目录】：

• 摘要2-4
• abstract4-9
• 引言9-11
• 第一章 人牙周膜细胞周期性张应力加载模型的建立11-21
• 1. 主要实验材料11-12
• 2. 实验方法12-15
• 2.1 人牙周膜细胞的分离、培养和鉴定12-14
• 2.2 PDLCs 组织来源鉴定14-15
• 3. 实验结果15-19
• 4. 讨论19-20
• 5. 结论20-21
• 第二章 弱激光照射对受周期性张应力的人牙周膜细胞ALP、Runx2、OCN mRNA表达的影响21-33
• 1. 主要实验材料21
• 2. 实验方法21-25
• 2.1 人牙周膜细胞周期性张应力及弱激光加载实验21-22
• 2.2 总 RNA 提取以及实时荧光定量 PCR（q RT-PCR）检测 ALP、Runx2、OCN 的 m RNA 表达22-25
• 2.3 统计学分析25
• 3. 实验结果25-31
• 4. 讨论31-33
• 第三章 弱激光照射对受周期性张应力刺激的人牙周膜细胞ALP、Runx2、OCN蛋白表达的影响33-41
• 1. 主要实验材料33
• 2. 实验方法33-37
• 2.1 实验分组33
• 2.2 人牙周膜细胞周期性张应力加载及弱激光照射实验33-34
• 2.3 收集蛋白样品，，用免疫印迹（Western Blotting）技术检测目标蛋白 ALP、OCN、Runx2 的蛋白表达34-37
• 3. 实验结果37-40
• 4. 讨论40-41
• 全文总结41-42
• 参考文献42-45
• 综述45-55
• 综述参考文献51-55
• 攻读学位期间的研究成果55-56
• 英文缩略词表56-57
• 致谢57-58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：1017651