miR-31-5p对C2C12细胞增殖与肌向分化的调控作用

发布时间：2017-10-17 13:22

  本文关键词：miR-31-5p对C2C12细胞增殖与肌向分化的调控作用

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【摘要】：背景:miRNA是一类小分子非编码RNA,可以通过与其靶mRNA的完全或不完全互补配对结合,在转录后阶段调控相关基因的表达。miRNA在人类及其他生物物种中都有不同程度的时空表达特异性,参与了包括发育、分化、肿瘤发生、病毒感染等多种生理和病理过程,对于miRNA与骨骼肌发育相关调控机制的研究是近几年的研究热点之一。骨骼肌发育与分化的过程,是多因子共同调控的结果,其中生肌调节因子(MRFs)起着至关重要的核心作用。四种生肌调节因子既可以在骨骼肌成肌过程的不同阶段发挥自己独特的作用,总体来说又对骨骼肌发育过程中有一定的协同作用。如MyoD与Myf5被认为是在骨骼肌发育的早期发挥细胞命运定向与启动后续成肌程序的作用,而Myogenin与MRF4被认为是在前者的下游,相当于被上述两因子激活后完成后续成肌细胞的融合促进骨骼肌的成肌分化。目前对成肌调节因子研究结果显示,在正常的成肌过程中四种成肌调节因子都有不同程度的表达,只是在不同的时期由各自发挥其主导作用。C2C12成肌细胞系是从小鼠C3H细胞中分离得到的成肌细胞系,体外培养时增殖与分化的能力都较强,可以通过改变培养基中存在血清的量来促进其肌向分化,较常被选为在体外研究骨骼肌成肌细胞增殖与分化的模型,在体外条件下模拟骨骼肌细胞的生长发育过程以供研究骨骼肌发育的具体调控机制。近年来对miR-31-5p研究的热点主要集中在其调控一些肿瘤的生物学行为上。miR-31-5p与其他已证实其调控机制的miRNA类似,通过对其靶mRNA的降解或阻碍后续蛋白翻译,进而通过发挥对下游对应基因表达的调控从而对后续生命活动发挥调控作用。但是,目前关于mir-31-5p对于骨骼肌细胞增殖、分化调控作用的相关研究还少有报道。目的:在体外条件下,通过检测c2c12细胞增殖时的细胞活性、体外诱导肌向分化不同阶段中各生肌因子的相对表达量,研究上调和下调mir-31-5p对c2c12细胞系增殖与肌向分化的影响,并进一步探讨可能的作用机制,为mirna调控骨骼肌发育相关的机制探究提供可能的理论依据。方法:1.建立c2c12细胞体外诱导肌向分化实验模型,检测肌向分化不同阶段mir-31-5p的相对表达量。2.利用脂质体转染技术,上调或下调c2c12细胞中mir-31-5p的表达量,并于转染24h后检测转染效率。3.应用cck-8法检测上调或下调mir-31-5p对c2c12细胞增殖水平的影响。4.将转染后的细胞继续体外诱导肌向分化,应用qrt-pcr技术检测各时期实验组与对照组中生肌调节因子myod与myogenin的相对表达量。结果:1.mir-31-5p在c2c12体外肌向诱导分化过程中呈动态表达,且在分化第四天,其表达较前期表达量显著降低(p0.001)。2.qrt-pcr结果显示,转染mir-31-5pmimics与inhibitor后24h后,转染mir-31-5pmimics的c2c12细胞中mir-31-5p的表达量显著高于阴性对照组,其上升倍数约为42倍(p0.01);而转染mir-31-5pinhibitor的c2c12细胞中mir-31-5p的表达量较阴性对照组显著降低。3.cck-8结果表明,上调c2c12细胞mir-31-5p的表达后,c2c12细胞增殖水平在48h时显著下降(p0.01);下调c2c12细胞中mir-31-5p的表达后,c2c12细胞增殖活性在24h、36h与48h时均显著升高(p0.01)。4.qrt-pcr结果显示,上调mir-31-5p后,c2c12肌向分化的第四天,myod和myogenin的表达均显著低于对照组(p0.05);下调mir-31-5p的表达后,在c2c12肌向分化的第四天,myod(p0.01)和myogenin(p0.05)的表达均显著高于对照组。结论:miR-31-5p可抑制C2C12细胞增殖,在C2C12诱导肌向分化过程中表达呈动态变化,同时对生肌调节因子MyoD和Myogenin表达有具有负调控作用,提示了miR-31-5p对C2C12细胞的增殖和肌向分化具有调控作用。
【关键词】：miR-31-5p C2C12 细胞系 生肌调节因子 增殖 分化
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R781
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-16
• 材料和方法16-21
• 1. 材料16-17
• 2. 方法17-21
• 结果21-26
• 讨论26-32
• 结论32-33
• 参考文献33-36
• 综述36-49
• 参考文献44-49
• 致谢49-50

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本文编号：1049078