低氧条件下红景天苷对脂多糖诱导的人牙周膜细胞活性氧及炎症因子表达的影响

发布时间：2017-10-17 18:15

  本文关键词：低氧条件下红景天苷对脂多糖诱导的人牙周膜细胞活性氧及炎症因子表达的影响

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【摘要】：研究目的:牙周炎(Periodontitis)是威胁人类口腔健康的两大慢性疾病之一,是由病原体及其代谢产物,尤其是脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激引起的持续性炎症免疫反应,导致局部牙周支持组织破坏,是牙齿松动和脱落的一个主要原因。流行病学调查显示:在复杂多变的高原环境下,机体血液变得“黏、浓、聚、凝”,牙周组织中氧浓度急剧降低,氧化应激升高,龈下菌群种类更加丰富,其中G-厌氧菌大量繁殖,牙周组织微环境变化,对细菌及其代谢产物的抵抗力下降,牙周炎症加重。由此可见高原牙周病的发病机制具有一定的特殊性,其重要防治策略是抗炎和抗氧化。然而,目前尚没有针对高原牙周病的特异性治疗药物,牙周炎的治疗仍是基础治疗加药物治疗或牙周手术治疗等,不仅治疗周期长,预后不佳,并且人工合成的治疗药物大多具有潜在的不安全性,侵袭性治疗还会给患者造成心理上的阴影,因此非常有必要寻找一种安全有效的药物。近年来,红景天苷(Salidroside,SAL)受到越来越多学者的关注,它是从药用植物红景天中提取的一种主要活性成分,具有免疫调节、抗疲劳、抗抑郁、抗炎、抗氧化等多种作用。但是,SAL是否对高原牙周病有治疗作用目前还未见相关报道。为探讨SAL对高原牙周病的作用,本课题参照国内外研究,选用牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)LPS刺激人牙周膜细胞建立牙周炎细胞模型并在1%O2低氧环境下培养,检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和细胞内外的肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factoralpha,tnf-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,il-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,il-6)、核转录因子-κb(nuclearfactor-kappab,nf-κb)及胞浆中抑制蛋白(inhibitorkappab,iκba)磷酸化的表达情况,初步探讨sal对低氧条件下lps诱导的人牙周膜细胞的保护作用及相关机制,为预防或治疗高原牙周病提供了新的思路。研究方法:1、改良酶消化组织块贴壁法原代培养人牙周膜细胞。2、用含sal终浓度为0、30、60、100ug/mlsal的dmem分别培养第5代人牙周膜细胞,并于培养后1、2、3、4、5、6d各时间点,采用mtt法检测各浓度组细胞的增殖活性。3、模型建立及实验分组:取第5代人牙周膜细胞并将其随机分为5组,分别用不含lps和sal的dmem(a组,对照组)以及含10ug/mllps+0ug/mlsal(b组,单纯lps组)、10ug/mllps+30ug/mlsal(c组)、10ug/mllps+60ug/mlsal(d组)、10ug/mllps+100ug/mlsal(e组)的dmem进行1%o2低氧连续培养6h后,收集各组细胞及其上清液,分别用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐法(2,7-dichlorodihydrofluoresceindiacetate,dcfh-da)检测各组细胞中的ros表达水平、反转录酶-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,rt-pcr)和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked-immunosorbentassays,elisa)检测各组细胞tnf-α、il-1β、il-6mrna和蛋白的表达水平、westernblot法检测a组、b组和10ug/mllps+100ug/mlsal细胞的转录因子-κb(nf-κb)信号通路的磷酸化情况。研究结果:1、采用改良酶消化组织块贴壁法,在体外能成功获得原代人牙周膜细胞。2、mtt实验结果显示:本实验最大剂量100ug/ml的sal不影响低氧条件下lps诱导的人牙周膜细胞的增殖活力(p(29)0.05)。3、dcfh-da实验结果显示:与对照组比较,单纯LPS组人牙周膜细胞内的ROS显著升高(P0.05);与LPS组比较,3个SAL实验组人牙周膜细胞内ROS的表达降低(P0.05),且具有剂量依赖性。4、RT-PCR和ELISA实验结果显示:和对照组比较,单纯LPS组人牙周膜细胞的TNF-α、IL-1β和IL-6在mRNA和蛋白质水平的表达显著升高(P0.05);与单纯LPS组比较,3个SAL实验组TNF-α、IL-1β和IL-6在mRNA转录水平和蛋白质水平的表达降低(P0.05),且具有剂量依赖性。5、Western blot实验结果显示:和对照组比较,单纯LPS组人牙周膜细胞的NF-κB和IκBa的磷酸化水平升高(P0.05);与单纯LPS组比较,100ug/ml的SAL实验组的人牙周膜细胞的NF-κB和IκBa的磷酸化水平降低(P0.05)。研究结论:1、本实验最大剂量100ug/ml的SAL不影响人牙周膜细胞的增殖,无毒副作用,是安全的。2、SAL可降低低氧条件下LPS诱导的人牙周膜细胞的ROS和TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子表达,具有一定的保护人牙周膜细胞的作用。这个保护机制可能是SAL抑制人牙周膜细胞NF-κB信号通路的磷酸化。3、SAL可作为高原牙周病的预防和治疗用药,为高原牙周病提供了一个新的治疗思路。
【关键词】：红景天苷 人牙周膜细胞 脂多糖 活性氧 炎症细胞因子 核转录因子
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R781.4
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-14
• 材料与方法14-30
• 结果30-36
• 讨论36-42
• 全文总结42-44
• 参考文献44-56
• 缩略语表56-58
• 致谢58-60
• 高原低氧环境与牙周炎症的相关性研究 综述60-74
• 参考文献68-74

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本文编号：1050306