二甲双胍通过miR-26a下调Mcl-1诱导人口腔癌细胞凋亡

发布时间：2017-10-22 08:28

  本文关键词：二甲双胍通过miR-26a下调Mcl-1诱导人口腔癌细胞凋亡

  更多相关文章： 口腔癌 二甲双胍 凋亡 Mcl-1 miR-26a

【摘要】：目的:以人口腔癌KB细胞为研究对象,研究二甲双胍对人口腔癌KB细胞体外增殖及凋亡的影响,并探讨二甲双胍对细胞影响的初步作用机制。方法:1.细胞经二甲双胍处理24 h后,在倒置显微镜下观察KB细胞生长和形态学的变化。MTT法检测细胞存活率,平板克隆观察二甲双胍对口腔癌细胞体外克隆形成能力的影响;2.KB细胞分组处理后,采用线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞内线粒体膜电位的变化情况;Annexin V-FITC/PI染色方法检测二甲双胍对KB细胞凋亡的影响;Western blot检测二甲双胍对KB细胞内Mcl-1,Bim,Bax及caspase-3蛋白的影响;3.cDNA Mcl-1上调Mcl-1后,MTT,JC-1观察上调Mcl-1二甲双胍对KB细胞增殖及凋亡的影响;Western blot法检测口腔癌细胞中Mcl-1,Bim,Bax及caspase-3蛋白表达的变化;4.qRT-PCR检测二甲双胍处理KB细胞后miR-26a表达水平的变化;5.转染miR-26a后,集落克隆实验和PI单染实验分别用于检测KB细胞过表达miR-26a后,二甲双胍对转染mir-26a的KB细胞体外增殖及凋亡的影响是否发生变化,随后,再用蛋白印迹法检测Mcl-1表达的变化。结果:1.不同浓度的二甲双胍对人口腔癌KB细胞体外增殖及凋亡的影响1)形态学结果显示,经不同浓度二甲双胍处理后,KB细胞可出现形态变圆,体积缩小,部分细胞发生边集并破裂成细胞碎片等显著的形态学变化。随着二甲双胍浓度的增加贴壁细胞数目逐渐减少,漂浮细胞逐渐增多;2)MTT细胞活力检测结果显示,二甲双胍可降低人口腔癌KB细胞的活力。与对照组相比,二甲双胍处理组的细胞活力明显降低,并呈现药物浓度和时间依赖的关系;3)平板克隆形成实验显示二甲双胍可显著抑制kb细胞的克隆形成能力;4)annexinv-fitc/pi染色显示二甲双胍能诱导细胞发生凋亡,并呈浓度依赖性。5)jc-1荧光检测,红绿荧光的相对比例降低,提示线粒体膜电位下降;6)westernblot结果表明二甲双胍能显著下调口腔癌细胞中mcl-1的表达,上调bim、bax的表达水平,并诱导caspase-3的活化。2.过表达mcl-1能够降低口腔癌kb细胞对二甲双胍的敏感性1)cdnamcl-1转染效率的检测将cdnamcl-1和空质粒转染进入口腔癌细胞kb中,westernblot结果显示转染cdnamcl-1组中mcl-1表达明显升高;2)cdnamcl-1转染降低口腔癌细胞对二甲双胍的敏感性mtt结果显示转染cdnamcl-1后kb细胞的存活率较未转染细胞明显提高,提示cdnamcl-1降低了kb细胞对二甲双胍的敏感性;jc-1结果显示转染cdnamcl-1能抑制二甲双胍引起的线粒体膜电位的下降。westernblot表明mcl-1的高表达抑制了kb细胞在二甲双胍作用下细胞内bax及bim蛋白的表达和caspase-3的活性。3.二甲双胍对kb细胞mir-26a的调节及mir-26a对细胞增殖凋亡的影响1)与对照组相比,二甲双胍可明显上调细胞中mir-26a的表达水平;2)用mir-26a的模拟物和抑制物分别转染kb细胞,结果显示,转染mir-26a模拟物后,与二甲双胍单独处理组相比较,kb细胞的增殖受到明显抑制,而mir-26a的抑制物则出现相反的结果。进一步试验发现,mir-26a的模拟物转染kb细胞后,mcl-1水平明显降低,且细胞凋亡率明显增加。结论:1.二甲双胍能显著抑制kb细胞的增殖并且诱导细胞凋亡;2.上调mcl-1后能降低口腔癌kb细胞对二甲双胍的敏感性;3.二甲双胍刺激口腔癌KB细胞后上调miR-26a的表达;4.二甲双胍对口腔癌增殖及凋亡的影响可能与二甲双胍上调miR-26a表达有关。
【关键词】：口腔癌 二甲双胍 凋亡 Mcl-1 miR-26a
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.8
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 引言11-13
• 材料与仪器13-16
• 方法16-28
• 结果28-38
• 讨论38-41
• 结论41-42
• 参考文献42-46
• 致谢46-47
• 附录A47-48
• 附录B48-52
• 附录C52-53
• 综述53-60
• 参考文献58-60

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 成杰;蔡明江;贾永莉;尹照华;;二甲双胍的应用现状调查[J];实用糖尿病杂志;2005年06期

2 潘明政;;二甲双胍伤肾吗[J];医药与保健;2008年11期

3 衡先培;;二甲双胍的临床应用[J];中国乡村医药;2006年02期

4 H.Mehnert,邵丙扬;二甲双胍在糖尿病治疗中的地位[J];The Chinese-German Journal of Clinical Oncology;1999年02期

5 王煜;;二甲双胍的临床应用疗效评析[J];药品评价;2012年10期

6 伍晓玲,梁常禧,罗碧云;诺和灵与甲双胍强化治疗2型糖尿病22例效果观察及护理[J];右江民族医学院学报;2002年04期

7 陈凌;二甲双胍的临床应用体会[J];山东医药;1994年06期

8 赵红玲;张雪坤;;二甲双胍的降糖外作用研究进展[J];医学理论与实践;2011年16期

9 ;古老的药物 崭新的应用[J];科技传播;2011年17期

10 郑媛媛;;甲双胍通过改变微生物叶酸和甲硫氨酸的代谢延缓秀丽隐杆线虫的衰老[J];中国病理生理杂志;2013年10期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 侯沃霖;张丹丹;刘芳;陆蔚;殷峻;李鸣;卢逢娣;包玉倩;贾伟平;;二甲双胍可降低女性2型糖尿病患者的血清CA125水平[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年

2 朱云云;冯怡;沈岚;王彬;阮克峰;从文娟;;二甲双胍预防2型糖尿病的尿液代谢组学研究[A];2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周论文集[C];2012年

3 安慧杰;魏蕊;杨进;王广;洪天配;;二甲双胍促进血管内皮一氧化氮合酶复偶联的作用及其机制[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年

4 杜云波;赵英萍;;二甲双胍致糖尿病乳酸性酸中毒12例的临床分析[A];中国病理生理学会危重病医学专业委员会第八届全国大会暨中华呼吸病学会呼吸生理和重症监护学组年会论文集[C];2008年

5 郭力;李显筑;王梅;;二甲双胍对糖尿病患者心血管危险因素的影响及其机理探讨[A];中华医学会第六次全国内分泌学术会议论文汇编[C];2001年

6 张丹丹;刘芳;唐峻岭;郑泰山;陆慧娟;谢君;卢逢娣;包玉倩;贾伟平;;2型糖尿病患者血清CA199水平的性别差异及二甲双胍对其影响[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年

7 吴加华;周嘉强;;二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的抑制作用及其机制[A];2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛论文摘要[C];2013年

8 吴加华;周嘉强;;二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的抑制作用及其机制[A];中国药理学与毒理学杂志(2013年6月第27卷第3期)[C];2013年

9 王述进;;二甲双胍对2型糖尿病患者血清c反应蛋白水平的影响[A];全国首届代谢综合征的基础与临床专题学术会议论文汇编[C];2004年

10 安慧杰;刘金波;柯静;王广;洪天配;;二甲双胍逆转波动性高糖诱导的内皮细胞功能失调的机制研究[A];中华医学会第十一次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2012年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 秦家珍;服二甲双胍监测肾功能[N];医药养生保健报;2007年

2 健康时报实习记者 井超;缓释降糖药别掰开吃[N];健康时报;2009年

3 钱荣立;二甲双胍不是减肥药[N];健康报;2003年

4 王欣;二甲双胍的临床新用[N];医药养生保健报;2006年

5 彦珉;二甲双胍的“后现代生活”[N];医药经济报;2008年

6 徐述湘;50年应用 二甲双胍成为降糖经典药物[N];中国医药报;2008年

7 章潮忠 袁克俭;“老当益壮”的二甲双胍[N];健康报;2006年

8 韩咏霞;五种情况慎用二甲双胍[N];医药经济报;2008年

9 裘影萍;特殊人群慎服二甲双胍[N];医药经济报;2009年

10 健康时报记者 戴志悦;服二甲双胍别喝酸奶[N];健康时报;2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 姚新明;二甲双胍对糖尿病肾脏疾病的保护作用及机制探讨[D];安徽医科大学;2014年

2 许国顺;二甲双胍对造血免疫系统辐射损伤防护作用及分子机制研究[D];北京协和医学院;2013年

3 汪莉;二甲双胍对奥氮平致精神分裂症体重增加者肝脏脂肪含量的影响[D];第二军医大学;2015年

4 刘瑛;二甲双胍通过mTOR信号通路对Hacat角质形成细胞增殖的影响[D];山东大学;2015年

5 张艳飞;二甲双胍对2型糖尿病合并结直肠癌患者预后的影响及其机制[D];南方医科大学;2013年

6 张涛;二甲双胍对膀胱癌的抑制作用及其机制研究[D];山东大学;2014年

7 李伟宁;二甲双胍对HaCaT细胞增殖信号通路及豚鼠耳银屑病模型影响研究[D];山东大学;2014年

8 黄为;二甲双胍对胆管癌细胞株RBE的作用及其机制研究[D];中南大学;2012年

9 肖行远;二甲双胍通过抑制IGF-1轴下调良性前列腺上皮细胞生长活性的研究[D];华中科技大学;2012年

10 范军;二甲双胍对大鼠海马神经元GABA_A受体转运调节及其抗焦虑作用[D];华中科技大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 许斌斌;二甲双胍、塞来昔布对小鼠结直肠肿瘤预防作用的研究[D];福建医科大学;2015年

2 王槐文;二甲双胍联合放疗诱导结直肠癌细胞凋亡的分子机制研究[D];福建医科大学;2015年

3 刘佳;二甲双胍对糖尿病大鼠的骨保护作用与内质网应激的关系[D];福建医科大学;2015年

4 王静璐;二甲双胍通过调节EGFR信号通路抑制子宫内膜癌细胞增殖的研究[D];郑州大学;2015年

5 史明星;二甲双胍对子宫内膜癌细胞系脂联素表达的影响[D];郑州大学;2015年

6 彭铮;二甲双胍通过p38MAPK信号通路抑制ERCC1基因逆转卵巢癌细胞的顺铂耐药性[D];郑州大学;2015年

7 王涛;二甲双胍对人食管癌细胞系KYSE450增殖和凋亡的影响及其机制[D];郑州大学;2015年

8 马彦荣;基于Octs和Mate1分别探究阿替洛尔和美托洛尔对大鼠二甲双胍药动学的影响[D];兰州大学;2015年

9 孟祥丽;二甲双胍增加食管鳞癌对顺铂化疗敏感性的机制研究[D];新乡医学院;2015年

10 丁跃;二甲双胍对人网膜脂肪细胞中v-SNAREs家族表达的影响[D];山西医科大学;2015年

，

本文编号：1077577