基因X高表达对OLK细胞的生物学影响

发布时间：2017-11-09 11:21

  本文关键词：基因X高表达对OLK细胞的生物学影响

  更多相关文章： 基因X 细胞增殖 迁移 口腔鳞状细胞癌

【摘要】：口腔鳞状细胞癌是口腔颌面部最常见的肿瘤,它具有发病率高,复发率高,预后差的特点,且具有较高的淋巴结转移率。保守的治疗方法在一定程度上会影响患者的生理功能如吞咽和语言功能,甚至影响面容美观;而积极治疗则难以避免并发症的发生。口腔鳞状细胞癌的病因有很多,其中一部分口腔鳞癌是由口腔黏膜白斑恶变而来。口腔黏膜白斑是口腔黏膜最常见的癌前病损,而吸烟和饮酒是导致口腔黏膜白斑的最主要原因,在临床上主要以组织病理检查来确诊口腔黏膜白斑,缺乏其他有效的途径早期检测其是否具有恶变风险。因此,探寻有效的能够早期检测出口腔黏膜白斑恶变的分子标记物成为降低口腔鳞状细胞癌发病率的一个重要的手段。目的:通过实现基因X的高表达,探索基因X对口腔黏膜白斑细胞DOK的增殖、迁移能力等生物学功能的影响。方法:利用Real time PCR和Western blot实验检测基因X在DOK和OSCCBD细胞中的m RNA和蛋白的表达水平,并构建真核高表达载体经鉴定后用LipofectamineTM 2000转染试剂瞬时转染DOK细胞,采用Real time PCR和Western blot检测其转染效率及m RNA和蛋白的表达情况;采用实时无标记细胞功能分析仪(RTCA MP)实时检测细胞转染后的增殖情况;采用Transwell法检测细胞转染后对迁移能力的影响。Western blot检测细胞转染高表达质粒后周期蛋白Cyclin B1的表达变化。使用遗传霉素G418对高表达转染DOK细胞进行稳定筛选并采用Western blot法检测转染后的目的蛋白表达情况。结果:与DOK细胞相比,基因X在OSCC-BD细胞中m RNA和蛋白水平表达均显著提高;成功构建基因X真核高表达载体,瞬时转染DOK细胞后,Real time PCR和Western blot实验结果表明基因X的m RNA和蛋白表达水平都提高,且基因X表达上调后促进细胞的增殖和细胞迁移能力(P0.05)。细胞周期蛋白Cyclin B1表达水平提高。基因X稳定高表达组重组蛋白表达显著提高,空白质粒转染组未见表达。结论:基因X真核高表达载体瞬时转染DOK细胞,基因X的表达上调,促进细胞的增殖和迁移,这些结果提示基因X可能与口腔鳞状细胞癌的发生相关,为进一步阐明基因X在口腔鳞状细胞癌的发生中的作用及相关机制奠定基础。基因X高表达后引起Cyclin B1表达上调,提示基因X可能与细胞周期调节有关。而且我们利用此载体成功构建了DOK细胞的Gene X稳定高表达细胞系。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.8

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本文编号：1161666