癌相关成纤维细胞促进唾液腺腺样囊性癌侵袭及其机制研究

发布时间：2017-11-11 05:25

  本文关键词：癌相关成纤维细胞促进唾液腺腺样囊性癌侵袭及其机制研究

  更多相关文章： 唾液腺腺样囊性癌 癌相关成纤维细胞 侵袭通道

【摘要】：目的:唾液腺腺样囊性癌(Salivary gland adenoid cystic carcinoma,ACC)侵袭性强,易发生远处转移。本研究的目的为探究体外条件下ACC来源的癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAF)的生物学特性,及其对ACC细胞侵袭的影响。方法:本研究通过HE染色方法,对两例ACC组织进行病理诊断;免疫组织化学染色的方法检测ACC组织间质中α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况。对这两个新鲜ACC组织中提取的原代细胞进行培养和纯化,并通过细胞免疫荧光染色的方法检测原代细胞中广谱细胞角蛋白(pan-cytokeratin,CK)、波形蛋白(vimentin,VIM)、α-SMA、成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activated protein,FAP)、成纤维特异性蛋白1(fibroblast specific protein 1,FSP-1)的表达情况。细胞划痕实验考察CAF细胞的迁移能力。Transwell小室细胞侵袭实验模型和微流控芯片模型考察CAF的侵袭能力。收集CAF的条件培养液(conditional medium,CM),通过细胞划痕实验和Transwell小室细胞侵袭实验考察CAF对ACC细胞迁移和侵袭能力的影响。通过微流控芯片模型,研究ACC细胞与CAF侵袭时的相互作用关系。通过抑制基质金属蛋白酶和干扰CXCL12/CXCR4信号通路来考查CAF对ACC侵袭的抑制作用。结果:观察HE染色切片,两例病例组织均为ACC,免疫组织化学染色结果表明α-SMA在ACC组织的间质中表达阳性。细胞免疫荧光染色方法鉴定从ACC组织中提取的原代CAF,结果显示这些细胞CK表达阴性,VIM表达阳性,几乎所有的细胞都表达FAP和FSP-1,大部分细胞表达α-SMA,提示我们提取这些原代细胞表达典型的CAF生物学标记物。传统的细胞划痕实验、Transwell小室细胞迁移实验以及Transwell小室细胞侵袭实验均显示CAF与正常牙龈成纤维细胞相比,其迁移能力和在垂直方向上的侵袭能力更强;微流控芯片的实验结果表明CAF在水平方向上也具有较强的侵袭能力。并且,与空白对照组相比较,CAF可以促进ACC细胞系SACC-LM和SACC-83细胞的迁移、侵袭。将SACC-LM和SACC-83细胞与CAF在微流控芯片平台上共培养,我们发现CAF总是位于侵袭通道的前沿,SACC-LM和SACC-83细胞沿着CAF在基质胶中建立的侵袭通道向前移动。而SACC-LM和SACC-83细胞与正常牙龈成纤维细胞共培养时,SACC-LM和SACC-83细胞位于侵袭的前沿。经过统计学分析发现,SACC-LM和SACC-83细胞与CAF共培养时,ACC细胞侵袭到基质胶中的面积更大,差别具有统计学意义。CAF促进ACC侵袭的抑制实验显示,GM6001完全抑制ACC和CAF细胞侵袭入基质胶内;AMD3100可以抑制SACC-LM和SACC-83细胞的侵袭,特别是SACC-LM和SACC-83没有沿着CAF建立的通道向前侵袭。结论:1.ACC来源的CAF不仅表达CAF典型的生物学标志物,而且能够促进ACC细胞的迁移、侵袭。2.CAF促进ACC侵袭的机制可能为,CAF首先在ECM中建立侵袭通道,然后CAF通过分泌CXCL12诱导ACC细胞尾随其后。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.8

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 饶寒敏;汤雪明;柴本甫;李慧;朱雅萍;;丹参对成纤维细胞成骨的扫描电镜观察[J];中国中西医结合杂志;2001年S1期

2 朱红梅;成纤维细胞对肿瘤发生发展的作用研究[J];医学综述;2002年06期

3 魏玉玲,邹庆,梁克玉;中药增骨Ⅰ号对体外成纤维细胞的影响[J];中医正骨;2004年01期

4 卢旭华,陈德玉,赵定麟;成纤维细胞成骨潜能的研究进展[J];骨与关节损伤杂志;2004年08期

5 魏海峰;井玲;魏雁虹;刘辉;齐玲;赵志涛;张秀云;李才;;氟对二维和三维培养的成纤维细胞胰岛素样生长因子-1表达的影响[J];中国生物制品学杂志;2010年05期

6 张诚s，

本文编号：1170025