7-脱氢胆固醇还原酶基因沉默对体外培养小鼠腭突融合的影响

发布时间：2017-11-24 01:00

  本文关键词：7-脱氢胆固醇还原酶基因沉默对体外培养小鼠腭突融合的影响

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【摘要】：目的通过RNA干扰抑制7-脱氢胆固醇还原酶(Dhcr7)基因在培养腭突中的表达,研究Dhcr7基因对腭突融合的影响。方法根据C57BL/6J小鼠Dhcr7基因特异性的siRNA序列构建pAdTrack-CMV-siDhcr7,阳性克隆的pAdTrack-CMV-siDhcr7质粒进行体外重组,筛选出抗卡那霉素的重组腺病毒p Ad Easy-1-siDhcr7质粒,酶切后制备腺病毒载体DNA转染胚胎腭突。取妊娠13.5 d的小鼠胚胎腭突共30对随机分为3组,每组10对。正常对照组、空白腺病毒对照组和实验组均用不含胆固醇培养基培养腭突,其中空白腺病毒对照组加入空白腺病毒,实验组加入Dhcr7siRNA腺病毒。培养48 h后固定腭突并提取Dhcr7 mRNA和蛋白,采用扫描电子显微镜(SEM)观察腭突融合情况,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分析Dhcr7 mRNA和蛋白的含量。结果 SEM检测显示,正常对照组和空白腺病毒对照组在培养48 h时两侧腭突融合,形成连续的上腭;而实验组几乎没有生长,两侧腭突之间有很宽的裂隙。RT-PCR和Western blot检测显示,实验组Dhcr7 mRNA和蛋白表达与正常对照组和空白腺病毒对照组相比均明显减少,其差异有统计学意义(P0.05)。结论 Dhcr7基因在腭突中的表达下调后,腭突融合失败,说明Dhcr7基因在腭突正常发育融合中起一定的作用。
【作者单位】： 青岛大学附属医院口腔颌面外科;山东省教育厅口腔临床医学重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81070817) 山东省自然科学基金资助项目(ZR2010HM054)
【分类号】：R782.22
【正文快照】： 7-脱氢胆固醇还原酶(7-dehydrocholesterol re-ductase,Dhcr7)基因突变将导致Dhcr7活性下降,胆固醇水平降低,其前体7脱氢胆甾醇等在体内聚集,发生包括腭裂在内的多发生长和发育畸形[1]。抑制Dhcr7的活性,可以阻碍胆固醇的代谢,阻断信号通路而引起一系列缺陷综合征[2-3]。本课

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本文编号：1220420