胰岛素样生长因子1通过mTOR通路促进牙髓干细胞增殖及成骨分化

发布时间：2017-11-24 10:07

  本文关键词：胰岛素样生长因子1通过mTOR通路促进牙髓干细胞增殖及成骨分化

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【摘要】：目的研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对牙髓干细胞(DPSCs)增殖及成骨分化能力的影响。方法分离、培养DPSCs后进行形态学观察。甲苯胺蓝、油红O染色检测DPSCs成软骨分化及成脂肪分化。加入0-200 ng/mL IGF-1,运用CCK-8法、细胞计数法和流式细胞仪检测其对DPSCs增殖的影响及其最佳浓度。在成骨分化培养基中加入100 ng/ml IGF-1分别刺激3、7、14、21天,并在第21天时加入PI3K和(或)mTO R通路抑制剂LY294002和(或)雷帕霉素,ALP及茜素红染色法检测阳性染色细胞比率,运用Western blot法检测成骨标记蛋白RUNX2、OSX、OCN及通路相关蛋白mTOR、p-mTO R、PI3K、p-PI3K、AK T、p-AKT和p-S6K表达情况。免疫荧光法检测COLⅠ表达情况。结果DPSCs呈类成纤维细胞样梭形外观,具有向成软骨分化、成脂肪分化的能力。给予0-200 ng/ml IGF-1刺激,在100 ng/ml浓度时,细胞增殖能力最强、倍增时间缩短、G1/G0期细胞比例减少。在刺激3、7、14和21天后ALP及茜素红染色阳性细胞比率显著增高,其中在3、7和14天时,成骨标记蛋白RUNX2和OSX表达上调;7和14天时成骨标记蛋白OCN表达上调。在此过程中,p-mTOR及p-S6K表达增加,mTOR信号通路被激活,抑制mTOR信号通路可以逆转IGF-1诱导的DPSCs成骨分化能力增加。结论我们的研究表明DPSCs经IGF-1刺激后可激活mTOR通路,增强DPSCs增殖能力及成骨分化能力,为DPSCs临床治疗骨质疏松提供了理论依据。
【学位授予单位】：南通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R781
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本文编号：1221875