BET抑制剂JQ1在压应力介导的大鼠颞下颌关节骨关节炎样病理变化中的作用机制研究

发布时间：2017-11-25 07:58

  本文关键词：BET抑制剂JQ1在压应力介导的大鼠颞下颌关节骨关节炎样病理变化中的作用机制研究

  更多相关文章： 髁突软骨 压应力 BET蛋白 JQ1 炎症 髁突 软骨下骨 压应力 JQ1 破骨细胞

【摘要】：第一部分BET抑制剂JQ1对超负荷应力作用下大鼠髁突软骨炎症的作用研究[目的]检测BET抑制剂JQ1能否抑制压力源性的大鼠颞下颌关节髁突软骨炎症,探究JQ1的内在作用机制。[方法]选择96只7周龄雄性SD大鼠用于实验,按本课题组自主设计的大鼠颞下颌关节压应力加载动物模型装置(专利号：201120210396.4),对加力组大鼠髁突软骨施加向上、向后的压应力(80g),加力时间设4天、7天和14天3个时间梯度,非加力组大鼠进行同样的操作但不实施实质性的压应力加载；由于14天组软骨下骨变化最为显著,因此我们选择14天为实验周期。再使用BET抑制剂JQ1进行处理,设置5μM、10μM、50μM三个浓度梯度。采用苏木素-伊红(HE)染色观察加力及加药后大鼠髁突软骨厚度、炎性浸润情况以及形态学变化。实时荧光定量聚合酶链式反应检测炎症相关因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达改变；因为50μM组JQ1作用效果最为显著,后续实验JQ1浓度均为50μM；免疫组化检测炎症相关因子TNF-α、IL-1β的表达改变；染色质免疫共沉淀检测Brd4与TNF-α、IL-8启动子区域结合情况变化。[结果]1.HE染色结果显示：与对照组相比,单纯药物处理髁突软骨厚度未见明显变化。加力4天后大鼠髁突软骨变薄(34%,P0.01),加力7天和14天大鼠髁突软骨显著变薄(7天,58%,P0.01；14天,60%,P0.01),两组间无明显差异,但是骨破坏程度14天组较7天组更为严重。JQ1(5μM、10gM、50gM)处理后能缓解14天压应力导致的大鼠髁突软骨的变薄,其中50μM组效果最为显著(5μM组恢复29%,P0.05；10μM组恢复36%,P0.01；50μM组恢复93%,P0.01)。2.qRT-PCR结果显示14天压应力加载后大鼠髁突软骨细胞炎症相关因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达显著升高,JQl可以抑制压力源性的上述因子表达升高,50μM组效果最为显著。IHC结果显示50μM JQ1可以抑制压力源性TNF-α和IL-1β升高。单纯加药组与空白对照在上述各项中亦无显著差异。3.chIP结果显示：与对照组相比,加力组Brd4与TNF-α、IL-8启动子区域结合增多,加力加药组两者结合较加力组降低。对照组、单纯加药组无显著差异。[结论]BET抑制剂JQ1可以缓解超负荷应力刺激下的大鼠髁突软骨的变薄。BET抑制剂JQ1可以通过抑制超负荷应力作用下髁突软骨Brd4与炎性因子启动子区域的结合,从而降低超负荷应力介导的髁突软骨炎性因子表达,这一效应具有浓度依赖性。第二部分BET抑制剂JQ1对超负荷应力作用下大鼠髁突软骨下骨骨破坏的作用研究[目的]探究BET抑制剂JQ1能否通过抑制破骨细胞分化成熟,缓解超负荷应力导致的大鼠颞下颌关节软骨下骨骨破坏。[方法]建模方法及分组同前,实验周期为14天,使用50μM浓度JQ1。采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察加力及加药后大鼠髁突软骨下骨破骨细胞数量变化；采用Micro-CT进行三维重建,检测大鼠髁突软骨下骨骨小梁形态变化,包括：骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁间隔(Tb.Sp)的变化；实时荧光定量聚合酶链式反应检测破骨细胞分化标志因子RANKL、 RANK、NFATcl、TRAP、Cathepsin K的表达改变。[结果]1. TRAP染色显示：对照组和单纯加药组未见明显差异。加力组TRAP染色阳性,破骨细胞数量增多。加力加药组破骨细胞数量较单纯加力组显著减少(25%,P0.05)。2. Micro-CT显示对照组和单纯加药组大鼠髁突软骨下骨形态无明显差异。加力后,大鼠髁突软骨下骨的BV/TV、Tb.N以及Tb.Th减少,同时Tb.Sp增加。加力加药后,大鼠髁突软骨下骨的BV/TV、Tb.Th(BV/TV增加27%,P0.01；Tb.Th增加9%,P0.01)均有所恢复。3. qRT-PCR结果显示：压应力加载后大鼠髁突破骨细胞分化标志因子RANKL、RANK、NFATc、TRAP、Cathepsin K的表达显著升高。而当关节腔注射JQ1后,可以抑制上述情况的发生。单纯加药组与空白对照在上述各项中亦无显著差异。[结论]BET抑制剂JQl可以减少超负荷应力作用下的大鼠髁突软骨下骨破骨细胞数目、抑制髁突软骨下骨骨吸收。其内在机制与BET抑制剂JQ1抑制了超负荷应力介导的髁突软骨下骨中破骨细胞分化成熟有关。
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R782.6

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈同度,张昌颖;素食大鼠的贫血现象[J];营养学报;1957年04期

2 陈伟强;赵善广;;自制注射用大鼠固定装置[J];上海实验动物科学;1992年04期

3 肖柳英,林培英,冯昭明,张丹;不同周龄的SD大鼠生理、生化及体重的正常值测定[J];中药新药与临床药理;1996年03期

4 李淑云;简易大鼠灌胃器的制作[J];锦州医学院学报;2001年04期

5 杨明智,陈积圣;一种大鼠抓取与固定的新工具介绍[J];上海实验动物科学;2001年03期

6 戴英,陆群;复方H_(505)对Wistar大鼠外周血的血液流变学指标的影响[J];中国血液流变学杂志;2001年01期

7 韦应波,孙喜庆,曹新生,姚永杰,冯岱雅,杨长斌;+Gz暴露时间对大鼠记忆功能和行为的影响[J];航天医学与医学工程;2003年01期

8 吕学军,郭俊生,李敏,周利梅,张永娟;晕船大鼠体内铁含量的变化[J];中国职业医学;2003年04期

9 汤仁仙,王迎伟,王慧,周峰;201A中药合剂对大鼠抗肾小球基底膜肾炎病变的影响[J];徐州医学院学报;2003年06期

10 孙同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陈伟;介绍一种简易的大鼠保定方法[J];上海实验动物科学;2004年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 尹音;孙振宇;胡敏;李冬霞;;持续性高正加速度对大鼠颞颌关节损伤的作用[A];第八届全国颞下颌关节病学及（牙合）学大会论文汇编[C];2011年

2 祝~=骧;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文编号：1225274