变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因groES-groEL突变的检测

发布时间：2017-12-08 03:12

  本文关键词：变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因groES-groEL突变的检测

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【摘要】：目的： 龋病是一种发生在牙体硬组织中的慢性进行性疾病，在以细菌为主，多种因素共同作用下发生。变形链球菌是公认的主要致龋菌，它能利用口腔内碳水化合物产酸导致脱矿化，进而破坏有机质，形成龋洞。近些年氟化物的防龋功能已得到广泛认知，并应用于临床。氟化物防龋主要是因为氟与羟基磷灰石结合，从而降低牙釉质脱矿、促进再矿化，并能抑制口腔中致龋菌的生长和产酸过程。但口腔局部高浓度氟化物的存在可导致耐氟菌株的出现，国内外学者已有研究证明变形链球菌耐氟菌株较其亲代拥有更强的致龋性和对氟化物的抗性。热休克反应是细胞应对胁迫环境时，所产生的一系列生理生化反应，它受各种压力因子的诱导，包括温度、酸、H2O2等。研究表明，变形链球菌groES-groEL基因在酸应激反应中受到激发，表达出GroEL分子伴侣，辅助新合成的及变性的蛋白折叠、组装、转运及降解，从而增强其酸适应性。本课题组前期实验已检测出变形链球菌耐氟菌株的耐酸相关基因dltC，Dgk，，comD，ccpA发生了个别位点的突变，但groES-groEL基因的突变情况尚未见报道。本实验对变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因groES-groEL进行突变位点的检测，从基因水平上完善了变形链球菌耐氟菌株耐酸机制，更为氟化物的合理应用、研发更有效的防龋及治龋方法提供了理论基础。 方法： 1.变形链球菌耐氟菌株（UA159-FR）的培养与鉴定 2.UA159-FR全基因组提取 3.目的基因groES-groEL扩增并纯化 4.重组质粒的构建：目的基因PCR产物与PMD-18T载体连接，转化入大肠杆菌感受态细胞中。 5.质粒的提取及鉴定 6.送检测序 结果： 1.实验用菌为UA159-FR鉴定成功 2.成功构建重组质粒 3.完成测序，使用BLAST将测序结果与Genbank上公布的变形链球菌UA159的groES-groEL基因序列进行对比，发现变形链球菌耐氟菌株groEL基因与亲代基因序列完全相同，groES基因有一处发生突变，位于1834963（T→C）。 结论： 成功构建了变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因groES-groEL重组质粒，并进行鉴定及基因测序，为变形链球菌耐氟菌株耐酸性的认识及今后龋病的防治提供了理论基础和新思路。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R781.1;R440

【参考文献】

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本文编号：1264821