内毒素刺激下不同静压力下人牙周膜成纤维细胞对IL-17等促炎因子表达的影响初探

发布时间：2017-12-19 01:18

  本文关键词：内毒素刺激下不同静压力下人牙周膜成纤维细胞对IL-17等促炎因子表达的影响初探

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【摘要】：实验目的：本实验通过体外培养人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament fibroblasts, HPDLF)并以牙龈卟啉单胞菌内毒素(Porphyromonas gingivalis Lipopolysaccharide, Pg.LPS)刺激建立好的HPDLF体外静压力模型,检测IL-17等炎性细胞因子在HPDLF中的表达情况,探讨静压力及Pg.LPS双重作用下IL-17A、IL-6及IL-1β在人牙周膜成纤维细胞内的表达变化,研究正畸力及炎症对人牙周膜成纤维细胞的联合作用,为牙周炎环境下的正畸牙移动及相关性牙根吸收的具体机制提供新思路。实验方法：1.采用组织块培养法对来源于健康前磨牙根中1/3的牙周膜进行分离与培养。采用免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC) SP法对培养的细胞进行来源鉴定,并采用噻唑兰比色法(MTT)绘制HPDLF生长曲线,建立HPDLF细胞系；2.MTT法检测浓度1～10μg/ml对HPDLF增殖活性的影响；3.体外用浓度为4μg/ml的内毒素刺激HPDLF,并施以0～5 g/cm2静压力模拟正畸加力。采用荧光定量PCR检测内毒素刺激下HPDLF在0-5g/cm2静压力加载24 h后IL-17AmRNA、IL-6mRNA的表达情况。4.采用ELISA检测内毒素刺激下HPDLF在0～5g/cm2静压力加载24 h后IL-17A、IL-6和IL-1β蛋白的表达情况。实验结果：1.所培养的细胞为长梭形,呈放射状或漩涡状生长,生长性状稳定,经细胞来源鉴定为中胚层来源细胞,结合取材部位可鉴定为HPDLF。 HPDLF的生长曲线呈“S”形,从接种的第2天开始,细胞进入对数生长期,细胞增殖速度在第6天变缓进入平台期。2.1～4μg/mlPg.LPS对HPDLF的增殖有明显促进作用,其中,4μg/ml浓度组中HPDLF细胞活力最强,5～7μg/ml浓度组中HPDLF细胞活力逐渐下降,8～10μg/ml浓度组细胞活力明显受到抑制。3.经荧光定量PCR检测,单纯静压力组及Pg.LPS+静压力组中,IL-17A、IL-6的mRNA相对表达量均呈力值相关性,随着静压力值的递增而表达增强,表达量分别在4g/cm2组和3g/cm2组达最大值,随后随力值的增大而表达量减小；在同等力值下,EL-17A、IL-6mRNA在单纯静压力组中的表达高于Pg.LPS+静压力组,其差异具有统计学意义。4.经ELISA检测,单纯静压力组及Pg.LPS+静压力组中,IL-1β、 IL-17A、IL-6的蛋白表达量均呈力值相关性,随着静压力值的递增而表达增强,其表达量分别在4 g/cm2组和3 g/cm2组达最大值,随后随力值的增大而表达量减小；在同等力值下,IL-1β、IL-17A、IL-6蛋白在单纯静压力组中的表达高于Pg.LPS+静压力组,其差异具有统计学意义。实验结论：1.采用组织块培养法培养HPDLF原代细胞,成功地建立了人牙周膜成纤维细胞系,第4～6代细胞,增殖旺盛,生物学性状稳定。2.过高浓度的内毒素会抑制HPDLF增殖,而适宜浓度的内毒素能促进HPDLF增殖,其中4μg/ml为最适浓度。3.内毒素能刺激HPDLF对IL-17A、DL-6及IL-1β等炎性细胞因子的表达,且表达量呈力值相关性,在3 g/cm2静压力刺激下表达量最大；但与静压力联合作用时对IL-17A、IL-6及IL-1β等炎性细胞因子表达促进作用减小。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R783.5

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本文编号：1306349