Runx2与Osx在修复性牙本质形成过程中表达的研究

发布时间：2017-12-21 02:04

  本文关键词：Runx2与Osx在修复性牙本质形成过程中表达的研究　出处：《第三军医大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：背景和目的:龋损和外伤是能引起牙髓炎性损伤,并最终导致人类牙列缺损的重要病因。然而当牙齿发生龋损、物理摩擦,外伤等轻微损伤时,髓腔内的牙髓细胞会发生迁徙,增殖,并分化为成牙本质细胞,进而矿化成熟,成为反应性牙本质,亦称修复性牙本质。研究牙髓的损伤后修复机制为保存患牙提供了可能。Runx相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)和Osx(Osterix)是骨发生及骨形成中重要转录因子,近期研究发现两者均参与调控牙齿的发生和形成。牙本质涎磷蛋白(Dentin sialoph-osphoprotein,DSPP)是成牙本质细胞分化成熟的标志性蛋白,研究已证实其转录受Runx2调控。成骨相关报道中提示,Osx是Runx2的下游基因,Runx2基因有缺陷时,检测不到Osx的表达,Osx激动子区域有Runx2特有的结合元素,Runx2通过与其相结合,直接调控Osx的表达和功能,但二者在修复性牙本质形成过程中是否发挥功能仍不明了,而在牙齿发育过程中,Osx可以调节DSPP的表达。因此,本课题建立大鼠牙髓损伤模型,观察损伤后不同时期修复性牙本质形成过程中Runx2和Osx基因表达模式的变化,初步探讨Runx2和Osx与修复性牙本质形成之间的关系。方法:1.建立大鼠牙髓损伤模型。60只体质量约为200g的雄性大鼠随机分为正常对照组和损伤模型组(n=10)。快机球钻在50只损伤模型组大鼠双侧下颌第一磨牙常规行开髓术,开髓后不做任何处理,以髓腔暴露时间0h,3h,12h,3d及7d对损伤模型组进行分组,正常对照组不做开髓处理。随后每组随机选取4只灌注处死(共24只),取其双侧下颌第一磨牙及周围下颌骨标本并制成切片,以苏木精-伊红(HE)染色法确定牙髓损伤模型的建立。2.观察Runx2、Osx和DSPP的蛋白和m RNA在大鼠下颌第一磨牙修复性牙本质形成时表达模式的变化。通过免疫荧光的方法对正常对照组及损伤0h,3h,12h,3d及7d组标本制备的切片进行染色,共聚焦显微镜下观察Runx2、Osx和DSPP蛋白在各模型组中表达模式的变化。脱颈处死正常对照组及损伤0h,3h,12h,3d及7d组大鼠(共36只)并提取双侧下颌第一磨牙,运用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR),对其总RNA进行定量分析,比较Runx2、Osx和DSPP m RNA在各组模型中表达量的变化。结果:1.牙髓损伤后成牙本质细胞迁徙变性,损伤下方出现急性炎症特征,在损伤7d,在损伤下方牙髓腔内可见修复性牙本质样结构形成。2.Real-time PCR法检测发现:Runx2 m RNA表达量在损伤后12h最高,且显著高于对照组(P0.01),损伤后3d,Runx2 m RNA表达量显著低于损伤后12h组(P0.01),直至损伤后7d,Runx2 m RNA表达量持续降低,明显低于损伤后12h组及3d组(P0.01),但较之正常对照组其表达量有显著差异。Osx和DSPP m RNA的表达量在损伤后0h较之对照组无明显差异(P0.05),从损伤后3h开始表达量呈逐渐上升趋势,且明显高于对照组,组间比较均有显著差异(P0.01);免疫荧光染色发现:Runx2、Osx和DSPP蛋白主要表达于损伤下方,Runx2表达呈“抛物线”状,损伤后3天表达最为强烈(P0.01),随后逐渐下降;Osx和DSPP表达均呈逐渐上调的趋势,Osx蛋白表达在损伤后7天上调最为明显(P0.01),而DSPP蛋白则在损伤后3天表达显著增强(P0.01)。结论:1.出生后的大鼠在牙髓组织受到机械作用时,发生炎症反应,大鼠磨牙牙髓具有形成修复性牙本质的潜能。2.Runx2、Osx和DSPP在牙髓损伤后的不同时期具有不同的表达模式,在不同部位表达模式亦不同。
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R781

【参考文献】

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1 胡超;李适廷;张纲;谭颖徽;;NICD过表达对人牙髓干细胞细胞增殖及细胞迁移的影响[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2014年04期

2 张驰;;成骨细胞特异性转录因子Osterix对骨形成作用的分子机制(英文)[J];北京大学学报(医学版);2012年05期

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本文编号：1314244