BMP2诱导人根尖乳头干细胞分化的作用及机制的研究

发布时间：2017-12-26 05:30

  本文关键词：BMP2诱导人根尖乳头干细胞分化的作用及机制的研究　出处：《山东大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的人根尖乳头干细胞(Stem cells from the apical papilla, SCAPs)具有成牙本质向分化、形成根部牙本质的潜能,在未发育完全的恒牙牙根部的发育过程中起重要作用。已有研究证明人骨形成蛋白2(human bone morphogenetic protein 2, BMP2)能够诱导牙组织来源的干细胞向成牙本质细胞分化,形成牙本质。然而关于BMP2对人根尖乳头干细胞的作用如何尚未见报道。本研究目的是研究BMP2对体外培养的人根尖乳头干细胞增殖及成牙本质向分化的影响及机制。方法及结果第—部分：SCAPs的分离培养、鉴定以及体外诱导分化酶消化法分离培养人根尖乳头细胞,传代后获得稳定生长的细胞。免疫荧光染色及流式细胞仪检测鉴定所培养的细胞干性。成脂诱导及矿化诱导证明所培养的细胞的多向分化潜能。第二部分：BMP2对SCAPs增殖和分化的影响选取含不同浓度的BMP2的培养液培养细胞,通过CCK-8方法检测BMP2对SCAPs增殖的影响,结果显示浓度为0-400ng/ml BMP2对细胞增殖无明显的促进或抑制作用(p0.05)。使用BMP2条件培养基(0-400ng/ml)诱导SCAPs的分化,检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性,结果显示ALP活性在0-200ng/ml的实验组是逐渐上升的,而在200ng/ml与400ng/ml组无统计学差异。所以在后续实验中我们选取200ng/ml为实验浓度。通过real-time PCR检测牙本质特异性标记物牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)以及成骨相关性转录因子(runt-related transcription factor2, Runx2)、骨涎蛋白(bone sialoprotein, BSP)、骨钙素(osteocalcin, OCN) mRNA的表达；Western Blotting检测DSPP、Runx2、BSP、OCN蛋白的表达。结果显示BMP2处理细胞后,DSPP、 Runx2、BSP、OCN mRNA及蛋白表达量升高。以上结果充分说明BMP2促进SCAPs的成牙本质／成骨向分化。第三部分MAPKs信号通路在BMP2诱导的SCAPs分化过程中的作用Western Blotting检测BMP2处理SCAPs后MAPKs信号通路蛋白磷酸化水平的变化,结果显示,BMP2促进JNK,ERK和p38的磷酸化,表明BMP2可以激活JNK, ERK和p38信号通路。在BMP2诱导SCAPs分化的同时,分别用20uM浓度的JNK抑制剂SP600125, ERK抑制剂U0126和p38MAPK抑制剂SB203580处理细胞,检测ALP活性,通过real-time PCR和Western Blotting分别检测DSPP、Runx2、BSP、 OCN mRNA和蛋白的表达。结果显示,抑制JNK, ERK和p38的活性后,人根尖乳头细胞ALP活性降低；DSPP、Runx2、BSP和OCN mRNA及蛋白表达水平下降。以上结果表明阻断JNK, ERK和p38MAPK信号通路可抑制BMP2诱导的SCAPs成牙本质/成骨向分化,证明MAPKs信号通路在BMP2对SCAPs成牙／成骨分化过程中起正向调控作用。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R781.34

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本文编号：1336013