牙龈卟啉单胞菌脂多糖对破骨细胞EphA2表达的调控

发布时间：2018-01-05 19:30

  本文关键词：牙龈卟啉单胞菌脂多糖对破骨细胞EphA2表达的调控　出处：《吉林大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：背景 牙周炎是以牙周结缔组织破坏和牙槽骨吸收为特点的慢性炎症性疾病，牙菌斑生物膜中的牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis，Pg）是牙周病变区主要的优势菌之一，该菌能够产生大量的毒力因子，如内毒素、胰酶样蛋白酶等，这些毒力因子是引起牙周结缔组织的破坏和牙槽骨的吸收的重要因素，其中内毒素也称脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁成分,是引发牙槽骨吸收的关键因子，它的作用是双方面的，一方面它可以通过促进破骨细胞的分化促进骨吸收，同时还可以抑制成骨细胞的分化而抑制骨形成。骨重建（bone remodeling）是一种有序、耦联（coupling）的骨吸收和骨形成过程，两者间处于动态平衡以维持骨组织内环境的稳态（homeostasis），且伴随终生。近来研究表明，ephrin/Eph双向信号转导通路参与调节骨代谢平衡，对维持骨稳态起重要作用，而其中的ephrinA2/EphA2信号在骨重建的骨吸收阶段发挥显著作用，而EphA2信号分子是否参与Pg-LPS介导的炎症性骨吸收，目前国内外尚未见研究报道。基于以上背景研究，我们提出了假设，，Pg-LPS是否通过EphA2/ephrinA2双向信号通路参与牙槽骨吸收呢？因此本实验通过用Pg-LPS与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7共培养，观察EphA2表达的变化，以探讨EphA2信号分子在Pg-LPS介导的炎症性吸收过程中的作用。 方法： 使用浓度为10g/ml的Pg-LPS与RAW264.7细胞共培养，分别在1、3、5d三个时间点，采用RT-PCR和Weston blotting技术分别检测EphA2基因和破骨相关基因的表达及EphA2蛋白质的表达，并通过TRAP染色检测破骨细胞的分化成熟情况。 结果： 1. RT-PCR结果显示：在Pg-LPS与RAW264.7细胞共培养0.5h、1h、2h三个时间点，实验组EphA2基因的表达比对照组明显增高。 2. RT-PCR结果显示：在Pg-LPS与RAW264.7细胞共培养后，EphA2基因的表达在3d和5d时，实验组较对照组均有明显增加（P0.01），其中3d组较5d组，EphA2基因的表达更为明显。但在1d时两组间EphA2基因表达无显著性差异。伴随着EphA2基因上调的同时，同时破骨相关基因c-fos、NFATc1、CtsK、ACP5、MMP9的表达都明显升高（P 0.05），但是CtsK在1d时和c-fos在5d时的表达无明显差异。 3. Weston blotting结果显示：在Pg-LPS与RAW264.7细胞共培养后，在1d时实验组较对照组EphA2的表达明显增加，但是在3、5d两个时间点EphA2的表达无明显差异。 4. TRAP染色结果显示：在Pg-LPS与RAW264.7细胞共培养5d后,实验组较对照组的TRAP阳性多核细胞（细胞核≥3）数目明显增多。 结论： 1.在无破骨诱导的条件下，Pg-LPS能够促进RAW264.7细胞表达EphA2基因。 2.在破骨诱导条件下，Pg-LPS在中期和晚期能够促进RAW264.7细胞向破骨细胞分化，但是在早期促进作用不明显。 3. Pg-LPS可能通过EphA2/ephrinA2信号通路参与调节RAW264.7细胞向破骨细胞分化的过程。
[Abstract]:background
Periodontitis is a chronic inflammatory disease of the periodontal connective tissue destruction and alveolar bone absorption characteristics, in plaque of Porphyromonas gingivalis (Porphyromonasgingivalis, Pg) is one of the dominant bacteria of periodontal disease in the region, the bacteria can produce a large number of virulence factors, such as endotoxin, trypsin like protease. These virulence factors are the important factors causing the absorption of periodontal connective tissue destruction and alveolar bone, which is also called endotoxin lipopolysaccharide (lipopolysaccharide, LPS) is a gram-negative bacterial cell wall components, is the key factor causing the absorption of alveolar bone, its role is twofold, on the one hand it can promote the differentiation of osteoclasts to promote bone absorption, but also can inhibit osteoblast differentiation and inhibit bone formation. Bone reconstruction (bone remodeling) is a kind of orderly, coupling (coupling) of bone resorption and bone formation. Between the two, in a dynamic balance to maintain a steady state in the bone tissue environment (homeostasis), and lifelong. Recent studies showed that ephrin/Eph bidirectional signal transduction pathway involved in the regulation of bone metabolism, plays an important role in maintaining bone homeostasis, and one of the ephrinA2/EphA2 signal in bone resorption phase and play a significant role. EphA2 signaling is involved in Pg-LPS mediated inflammatory bone resorption, it has not yet been reported. Based on the above background, we put forward the hypothesis, whether the Pg-LPS through the EphA2/ephrinA2 bidirectional signaling pathways involved in alveolar bone resorption? So Pg-LPS and RAW264.7 in mouse macrophage co culture through this experiment, to observe the changes of the expression of EphA2 the inflammatory process in order to investigate the absorption of EphA2 signal molecules in Pg-LPS mediated in vitro.
Method锛

本文编号：1384529