苯妥英钠对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞增殖和表达TNF

发布时间：2016-10-23 20:55

  本文关键词：苯妥英钠对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞增殖和表达TNF-α的影响，由笔耕文化传播整理发布。

《郑州大学》 2015年

苯妥英钠对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞增殖和表达TNF-α的影响

余方方  

【摘要】：研究背景牙周病严重威胁人类健康,在我国牙周病的发病率也呈逐年增高的趋势。牙周病是一种慢性炎症性疾病,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是牙周病的诱因之一。苯妥英钠(Phenytoin,PHT)是传统的抗癫痫药物,因发现其能引起牙龈增生(gingival overgrowth,GO),因此有关其对创面愈合的作用广泛开展。苯妥英钠对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,h PDLFs)增殖有促进作用。有研究表明在体外用LPS刺激牙周膜细胞后,其可分泌IL-1β和TNF-α,除此之外,与两种炎症因子相关的的基因的表达水平也明显地升高[1]。目前尚未有关于苯妥英钠对LPS作用下h PDLFs增殖和表达TNF-α的研究,因此本实验采用不同浓度的苯妥英钠和LPS与h PDLFs共同培养,体外观察苯妥英钠对LPS刺激下h PDLFs的生物学作用,探讨其在牙周病症控制中的作用,为治疗牙周病提供一定的依据。目的1.研究在体外培养人牙周膜成纤维细胞的方法。2.观察苯妥英钠(Phenytoin,PHT)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下h PDLF增殖的影响。3.观察苯妥英钠(Phenytoin,PHT)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下h PDLF表达TNF-α的影响。实验方法1.采用改良酶消组织块法培养h PDLFs。2.采用四甲基偶氮哇盐(MTT)比色法检测苯妥英钠对LPS作用下的h PDLFs增殖的影响。3.采用免疫细胞化学法检测苯妥英钠对LPS作用hPDLFs表达TNF-α的影响。实验结果1.采用改良酶消组织块法可以培养出h PDLFs,经形态学鉴定细胞呈长梭形或纺锤形,呈典型的成纤维细胞样;经免疫细胞化学鉴定抗波形丝蛋白抗体呈阳性,胞质呈棕黄色,抗角蛋白抗体呈阴性,胞质不着色,证明所培养细胞属于间充质来源。2.MTT法测细胞增殖实验结果显示:不同浓度(0.01mg/L-100mg/L)的LPS均可以明显地抑制h PDLFs的增殖活性;适宜浓度(5mg/L-100mg/L)的苯妥英钠可以促进h PDLFs增殖活性,但是过高浓度(500mg/L)的苯妥英钠会抑制h PDLFs增殖活性。100mg/L的苯妥英钠可以拮抗LPS对h PDLFs增殖的抑制作用。3.免疫细胞化学法结果显示:LPS明显地增强了hPDLFs的TNF-α的表达,而100mg/L的苯妥英钠作用后可明显地减弱h PDLFs内TNF-α的表达。实验结论1.苯妥英钠在适宜的浓度下(5mg/L-100mg/L)对h PDLFs的增殖有促进作用。2.100mg/L的苯妥英钠不仅能拮抗LPS对h PDLFs的增殖的抑制作用,还可以对TNF-α的表达有抑制作用。3.苯妥英钠不仅可以控制炎症,还能促进h PDLFs增殖,因此有可能用于牙周病的治疗。

【关键词】：
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R781.4
【目录】：

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