骨髓间充质干细胞对牙髓损伤的修复及经典Wnt通路在其中的作用的体内研究

  本文关键词：骨髓间充质干细胞对牙髓损伤的修复及经典Wnt通路在其中的作用的体内研究，由笔耕文化传播整理发布。

《第四军医大学》 2012年

骨髓间充质干细胞对牙髓损伤的修复及经典Wnt通路在其中的作用的体内研究

郝靖惠  

【摘要】：牙齿在受到外界各种刺激，如龋病、磨耗、外伤等，均可引起牙本质缺损，缺损到一定程度会导致牙髓出现一系列抵御刺激的自身修复反应。目前认为牙髓干细胞在牙本质-牙髓的损伤修复中具有非常重要的作用，然而，牙源性干细胞来源匮乏、扩增困难，且已有很多文献报道了骨髓间充质干细胞（BMMSCs）可分化为多种细胞，如成骨细胞、软骨细胞、肌细胞、神经细胞、皮肤细胞等，并且在骨、软骨、肌腱、神经、皮肤损伤的修复中也起着重要作用，BMMSCs已被认为是组织再生修复的重要种子细胞。目前许多研究证明经典Wnt信号通路在早期未分化细胞的分化、迁移等多方面起着重要作用。 牙齿是人体的器官之一，当牙髓损伤时，机体内BMMSCs是否参与其修复以及经典Wnt信号通路在其中的作用尚未见报道。本实验将利用绿色荧光蛋白转基因大鼠的骨髓间充质干细胞嵌合SD大鼠牙本质缺损模型研究BMMSCs在牙髓损伤修复中的作用，以及经典Wnt通路在这一修复过程中的调节作用。 实验分为两部分： 1. BMMSCs与大鼠切牙Apical bud复合后肾被膜下移植实验 目的：探讨经典Wnt信号通路在骨髓间充质干细胞向牙本质样分化中的作用。 方法：将BMMSCs分为三组：（1）对照组：正常的BMMSCs，不经过任何处理；（2）Wnt3a组：BMMSCs经100ng/ml浓度的Wnt3a刺激48h；（3）DKK-1组：BMMSCs经100ng/ml浓度的DKK-1刺激48h。然后分别与大鼠切牙Apical bud复合，移植到大鼠肾被膜下，2周后取材，，切片，HE和免疫组化染色观察。 结果：三组移植物均有牙髓-牙本质复合体样结构形成，与对照组相比，DKK-1组可见有更多的矿化组织形成，并有较多表达DMP-1、DSP的细胞，而wnt3a组仅形成极少的矿化组织，且仅有较少表达DMP-1、DSP的细胞。 结论：经典Wnt通路可能抑制BMMSCs向成牙本质样细胞的分化及矿化的形成。 2.利用GFP-BMMSCs嵌合SD大鼠牙本质缺损模型研究BMMSCs对牙髓损伤的修复以及经典Wnt通路的调节作用 目的：探讨骨髓间充质干细胞是否参与牙髓损伤的修复以及经典Wnt通路在这一过程中的调节作用。 方法：利用绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞（GFP-BMMSCs）嵌合SD大鼠模型，实验分为三组：（1）对照组：经尾静脉所注射的GFP-BMMSCs为正常细胞，不经过任何刺激;（2）Wnt3a组：尾静脉所注射的GFP-BMMSCs经100ng/ml浓度的Wnt3a刺激48h;（3）DKK-1组:尾静脉所注射的GFP-BMMSCs经100ng/ml浓度的DKK-1刺激48h。通过制备牙本质缺损构建牙髓损伤模型，于牙本质缺损5d,10d,15d后取材，切片，HE及免疫荧光染色，分别观察牙髓的病理变化和损伤修复情况以及GFP-BMMSCs在牙髓组织中的分布情况和变化。 结果：（1）牙本质缺损组初期有牙髓充血，后期有修复性牙本质形成，免疫荧光染色可见牙髓组织中有荧光细胞的分布，且牙本质缺损组比正常组中可见更多的荧光细胞。（2）与对照组相比，同一时间点，DKK-1组有更多修复性牙本质形成，且牙髓组织中可见更多的荧光细胞，相反，Wnt3a组修复性牙本质形成较少，牙髓组织中荧光细胞也较少。 结论：（1）牙髓损伤时，骨髓间充质干细胞可以迁移到损伤的牙髓处参与损伤的修复。（2）通过抑制经典Wnt信号通路可以促进牙髓损伤修复的过程。

【关键词】：
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R782.2
【目录】：

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