穿心莲内酯对牙龈卟啉单胞菌胰酶样蛋白酶活性的影响

  本文关键词：穿心莲内酯对牙龈卟啉单胞菌胰酶样蛋白酶活性的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

《吉林大学》 2016年

穿心莲内酯对牙龈卟啉单胞菌胰酶样蛋白酶活性的影响

仲琦  

【摘要】：牙周病是口腔两大主要疾病之一,在我国患病率居于龋病之上。牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)是慢性牙周炎的主要致病菌,而胰酶样蛋白酶(trypsin-like protease,TLP)为P.g的重要毒力因子,是目前研究的热点。穿心莲内酯(andrographolide,Andro)作为中草药提取物在我国来源广泛且毒副作用小,并具有抗炎抗菌等多方面作用。目的:本实验拟选用穿心莲内酯为研究对象,观察其对牙龈卟啉单胞菌的生长能否起到抑制作用;并通过研究其对牙龈卟啉单胞菌胰酶样蛋白酶的活性是否有影响及其影响程度,为穿心莲内酯应用于牙周炎的预防及治疗提供理论基础。方法:本实验的实验菌株为P.g W83,采用二倍稀释法配比药物浓度进行药敏实验。实验一:测定穿心莲内酯对P.g的最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC)。实验二:测定培养物结合态TLP和游离态TLP活性及含量,计算TLP的比活,评价穿心莲内酯。配制液体牛心脑浸液培养基(BHI),P.g浓度为108CFU/ml,穿心莲内酯终浓度分别为MIC的l/2、l/4和l/8,加入一定浓度的P.g菌悬液及不同浓度的穿心莲内酯,在37℃恒温箱内厌氧培养48小时后,收集离心后的培养物上清液,并超声破碎剩余菌细胞,收集破碎后菌细胞上清液,测定菌细胞破碎后上清液及培养物上清液中TLP活性及其含量,计算TLP的比活。结果:在P.g浓度为108CFU/ml时,穿心莲内酯对P.g的生长抑制作用较明显,穿心莲内酯的MIC为6mg/ml,其MBC为12mg/ml。P.g的TLP存在两种形式:结合态(与菌细胞结合)和游离态(分泌到细胞外),TLP主要的存在形式为与菌细胞结合的结合态。游离态TLP水解蛋白的能力较结合态弱,穿心莲内酯的浓度越弱,酶比活越高,对P.g的TLP酶的抑制作用越弱。结论:穿心莲内酯对P.g的生长有抑制作用,MIC为6mg/ml,MBC为12mg/ml;穿心莲内酯对P.g游离态TLP和结合态TLP的活性及蛋白水解能力均有抑制作用,浓度越大,抑制作用越强,且对游离态TLP抑制作用强于结合态TLP。

【关键词】：
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R781.42
【目录】：

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