蓝莓花青素通过下调p53基因DNA甲基化抑制口腔癌KB细胞增殖及诱导细胞凋亡
本文选题：花青素 切入点：抗癌 出处：《遗传》2014年06期
【摘要】：文章从内蒙古野生蓝莓(Vaccinium uliginosum Lim)中提取花青素,观察其对口腔癌细胞株KB的增殖及凋亡的作用,探讨其作用机制与p53基因甲基化的相关性。利用含0.1%盐酸的甲醇提取花青素,用高效液相色谱-质谱(High performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS)鉴定花青素的成分。利用四甲基偶氮唑蓝(Methylthiazolyl-tetrazolium,MTT)比色法、流式细胞术、免疫荧光法、免疫细胞化学法和Western blot法分析蓝莓花青素对KB细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和p53蛋白表达的影响;利用甲基化特异性PCR法(Methylation-specific PCR,MSP)分析蓝莓花青素诱导细胞凋亡与p53基因甲基化的关系。结果显示,内蒙古自治区的野生蓝莓中至少存在14种花青素成分;蓝莓花青素呈剂量依赖的方式抑制KB细胞增殖,诱导细胞周期阻滞在G2/M期,而且能诱导细胞凋亡;蓝莓花青素处理后Caspase-9蛋白和细胞色素C的表达明显增加;Western blot结果表明蓝莓花青素可以诱导KB细胞中p53蛋白表达上调;MSP结果表明随蓝莓花青素浓度增加,未甲基化的p53的比例增加,说明p53的甲基化状态有所下调。
[Abstract]:Anthocyanins were extracted from wild blueberry Vaccinium uliginosum Lims in Inner Mongolia. The effects of anthocyanins on proliferation and apoptosis of oral cancer cell line KB were observed, and the relationship between the mechanism of anthocyanin and p53 gene methylation was discussed. Anthocyanins were extracted by methanol containing 0.1% hydrochloric acid. The anthocyanins were identified by high performance liquid chromatography-mass chromatography-mass HPLC-MS.Methylthiazolyl-tetrazoliumium (MTT) colorimetric assay, flow cytometry, immunofluorescence, immunocytochemistry and Western blot were used to determine the proliferation of KB cells. Effects of cell cycle, cell apoptosis and p53 protein expression. The relationship between apoptosis induced by blueberry anthocyanin and p53 gene methylation was analyzed by methylation-specific PCR. There are at least 14 anthocyanins in wild blueberries in Inner Mongolia Autonomous region, and blueberry anthocyanins inhibit the proliferation of KB cells in a dose-dependent manner, induce cell cycle arrest in G _ 2 / M phase, and induce apoptosis. The expression of Caspase-9 protein and cytochrome C increased significantly after treatment with blueberry anthocyanin. The results showed that blueberry anthocyanin could induce the up-regulation of p53 protein expression in KB cells. The results showed that the expression of p53 protein increased with the concentration of blueberry anthocyanin. The proportion of unmethylated p53 increased, indicating that the methylation of p53 was down-regulated.
【作者单位】： 内蒙古医科大学分子生物学研究中心;
【基金】：国家自然科学基金项目(编号:81341139) 内蒙古自然科学基金项目(编号:2013MS11100)资助
【分类号】：R739.8
【参考文献】
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【共引文献】
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，本文编号：1676576
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