骨保护素缓释系统的制备及体外实验

发布时间：2018-03-31 18:06

本文选题：骨保护素　切入点：聚乳酸羟基乙酸　出处：《郑州大学》2017年硕士论文

【摘要】：背景与目的骨量不足一直是制约口腔种植适用性和成功率的重要因素。随着破骨细胞骨吸收机制相关研究的不断深入,抑制破骨细胞分化形成的骨代谢平衡调控可能为骨量不足问题的解决提供了一种可行方案。目前研究显示,骨保护素/核因子-κB受体活化因子配体/核因子-κB受体活化因子(OPG/RANKL/RANK)信号转导通路在破骨细胞的激活过程中发挥关键作用,OPG可以与RANKL竞争性结合,阻断其与破骨细胞前体、成熟破骨细胞表面的RANK受体结合,从而抑制破骨细胞的分化形成并加快其凋亡。OPG在预防口腔正畸效果反弹、治疗绝经后骨质疏松、体外RAW264.7细胞系诱导培养等方面的研究也确认了其抑制破骨细胞分化形成、减少骨量丢失的作用。由于OPG全身给药可能引发心血管、骨硬化症等系统并发症,局部直接用药又容易药物流失,目前有学者提出OPG局部缓释给药的用药途径以提高其利用率,降低用药风险。PLGA作为最常用的生物降解型材料,以其为载体构建的药物缓释给药系统具有良好的生物相容性。本课题拟通过PLGA包裹rh OPG构建微球缓释系统,对比分析传统和改良球/液分离方法所得缓释微球在形态结构、载释药特性方面的差异;通过体外破骨细胞诱导培养,验证rh OPG/PLGA微球缓释系统的生物安全性、生物有效性,为下一步的动物实验提供支持。方法1、复乳溶剂挥发法配合球/液传统分离法和改良分离法制备空白PLGA微球和rh OPG-PLGA微球,并通过激光粒径分析仪、光学和电子显微镜、rh OPG-ELISA检测对比分析微球粒径、形态、载药率、包封率以及释药特性。2、处死4周龄SD大鼠,分离、提纯胫、股骨全骨髓细胞,随机设置空白PLGA组、rh OPG/PLGA组和对照组进行实验因素处理,倒置显微镜下观察及HE染色、TRAP染色分析细胞生长状态、细胞类型和数量,SPSS 21.0对实验数据进行统计分析。结果1、传统分离组:空白PLGA微球粒径(152±13)um,rh OPG-PLGA微球粒径(151±21)um,微球形态不规整,有粘连,空白PLGA微球镜下见中央透光或折光圆形亮区;rh OPG载药率5.25*10-7,包封率62.49*10-2,1d突释率为27.25*10-2,28d累计释药89.91*10-2。2、改良分离组:空白PLGA微球粒径(142±19)um,rh OPG-PLGA微球粒径(157±16)um,形态圆整,无粘连,微球表面微孔均匀;rh OPG载药率7.69*10-7,包封率51.72*10-2,1d突释率为37.96*10-2,28d累计释药98.27*10-2。3、细胞培养:空白PLGA组和对照组可见TRAP阳性的破骨细胞或破骨样细胞,胞浆红染、有大小不等的空泡,胞膜边缘不规则、有伪足样突起。rh OPG-PLGA组观察到相对较多单核细胞生成,TRAP阳性细胞较少或者无。4、TRAP阳性细胞计数:空白PLGA组和对照组差异无统计学意义(P0.05);rh OPG-PLGA组与其余两组差异有统计学意义(P0.05)。结论1、复乳溶剂挥发法制备的rh OPG/PLGA缓释微球在粒径分布、载药率、包封率以及释药特性方面均达到了预期效果,改良球/液分离相较于传统分离法可以提高药物利用率、减少微球粘连。2、rh OPG/PLGA微球缓释系统可以在体外抑制全骨髓细胞向破骨细胞的分化形成,具有良好的生物活性、生物安全性。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R783.6

【参考文献】