STAT3蛋白在IGF-I介导的成肌细胞增殖中的作用

发布时间：2018-04-02 15:36

  本文选题：STAT3　切入点：IGF-I　出处：《山东大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的： 探索体外胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)促进L6成肌细胞增殖的适宜浓度,探讨信号转导及转录活化因子3(STAT3)在IGF-Ⅰ介导的L6成肌细胞增殖中的作用。方法： 使用10ng/ml,50ng/ml,100ng/ml,200ng/ml,300ng/ml的IGF-Ⅰ作用于L6成肌细胞,2%FBS培养基作为对照组,分别作用0h、12h、24h、48h, MTT法检测各实验组及对照组细胞增殖活性；利用100ng/ml的IGF-Ⅰ作用于L6成肌细胞0h、12h、24h、48h,2%FBS培养基作为对照组,提取各组细胞的总RNA和总蛋白,应用RT-PCR技术及Western-Blotting免疫印迹技术检测STAT3蛋白基因转录水平及蛋白表达水平的变化情况及磷酸化STAT3蛋白P-STAT3的表达情况；利用JAK-STAT3通路抑制剂AG490预处理细胞后,再利用100ng/ml的IGF-I作用于L6成肌细胞24h,应用RT-PCR技术及Western-Blotting免疫印迹技术检测STAT3蛋白基因转录水平及蛋白表达水平的变化情况及磷酸化STAT3蛋白的表达变化,MTT法检测各组细胞增殖活性的变化。 结果： (1)当IGF-I浓度小于100ng/ml时,随着IGF-I浓度的升高,各时间段内成肌细胞增殖能力均逐渐增强,变化有显著性差异(P0.05)；当IGF-I浓度大于100ng/ml时,细胞增殖能力随IGF-Ⅰ浓度上升增强不明显,变化无显著性差异(P0.05)。(2)在0-24h时间段内,成肌细胞在IGF-Ⅰ作用下增殖能力逐渐增强,24h时达到高峰,变化有显著性差异(P0.05)。24h后,IGF-Ⅰ浓度低于100ng/ml的实验组细胞增殖能力下降,变化有显著性差异(P0.05); IGF-Ⅰ浓度高于100ng/ml的实验组细胞增殖速度变缓,但仍维持在较高水平,变化有显著性差异(P0.05)。(3)经100ng/ml IGF-ⅠI诱导组细胞的STAT3蛋白无论基因转录水平还是蛋白表达水平均高于对照组,有显著性差异(P0.05)。实验组细胞各时间段之间STAT3,总蛋白表达水平无明显差异(P0.05), p-STAT3蛋白表达水平在0～24h内逐渐升高,在24h达到高峰,变化有显著性差异(P0.05),其后表达水平下降,有显著性差异(P0.05)。(4)AG490处理组细胞增殖活性明显低于未处理组,有显著性差异(P0.05)。经AG490预处理组细胞STAT3总蛋白表达水平与未处理组细胞无明显差异(P0.05), p-STAT3表达明显低于未经AG490处理组细胞,有显著性差异(P0.05)。 结论： 一定浓度的IGF-Ⅰ对成肌细胞增殖有促进作用,在IGF-Ⅰ介导的成肌细胞增殖过程中,STAT3蛋白被激活,部分阻断细胞STAT3蛋白磷酸化后,细胞增殖能力显著下降,我们由此可推断STAT3蛋白在IGF-Ⅰ介导的成肌细胞增殖过程中发挥着重要作用。
[Abstract]:Objective:To explore the appropriate concentration of insulin-like growth factor 鈪，

本文编号：1701063