透明质酸合酶2在口腔癌相关成纤维细胞中的表达及其作用

发布时间：2018-04-03 11:16

  本文选题：透明质酸合酶2　切入点：Cal27　出处：《南京医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts, CAFs)是一类来源尚不清楚,位于肿瘤基质中的生物学行为活跃的成纤维细胞。α-SMA(α-smooth muscle actin, α-平滑肌肌动蛋白)通常用于鉴定其表型。CAFs与肿瘤发生发展间的联系一直是研究领域的热点,目前针对CAFs设计的靶向药物已进入临床试验阶段。透明质酸合酶2(Hyaluronan synthase2,HAS2)是广泛存在于脊椎动物中催化透明质酸HA合成的三种酶之一,其与胚胎发育、肿瘤、关节炎等疾病密切相关。本课题在分析HAS2在口腔癌组织标本中表达特点的基础上,探讨HAS2在CAFs影响口腔癌细胞生物学行为中的作用及相关机制,为进一步认识肿瘤微环境与口腔癌发生发展的关系、以及针对肿瘤微环境的生物学治疗提供依据。 第一部分：透明质酸合酶-2在口腔鳞癌中的表达与意义 目的：检测口腔癌临床标本中HAS2的表达分布特征,并分析其与临床病理参数及α-SMA阳性表达成纤维细胞之间的关系。 方法：收集48例无放化疗病史的口腔癌患者的石蜡包埋肿瘤组织,以及配对的16例阴性切缘处取得的石蜡包埋正常黏膜组织,常规制作成5μm厚的病理切片。利用免疫组织化学的方法对标本进行染色。根据HAS2, α-SMA在肿瘤组织及正常组织中的表达情况进行评分,所得数据进行统计学分析。 结果：HAS2在口腔癌组织肿瘤细胞中表达的阳性率为93.8%(45/48),在肿瘤基质中表达的阳性率为52.8%(25/48)；HAS2在正常口腔黏膜上皮细胞的表达阳性率为93.8%(15/16),在上皮下结缔组织中表达的阳性率为12.5%(2/16)。肿瘤基质中HAS2的表达情况与临床分期细=0.02)、淋巴结状态(p=0.02)、α-SMA阳性的CAFs (p0.01)之间存在相关性。 结论：HAS2在口腔癌发生发展、转移及肿瘤基质激活中可能发挥重要生物学作用。 第二部分：透明质酸合酶-2在癌相关成纤维细胞影响口腔癌细胞生物学行为中的作用 目的：检测CAFs对舌鳞癌细胞株Ca127生物学行为的影响,探讨HAS2在CAFs介导的Ca127侵袭行为中的作用及相关分子机制。 方法：分别从同一舌癌患者手术切除标本的癌组织及癌旁组织获取CAFs和NFs。免疫细胞化学、Western blot鉴定细胞表型。通过MTT、间接共培养模型、侵袭试验比较NFs及CAFs对Ca127细胞增殖、上皮-间质转化、侵袭能力的影响。实时定量RT-PCR及Western blot检测HAS1,2,3在两型成纤维细胞中的表达。观察HAS抑制剂4-MU处理CAFs对Ca127细胞生物学特征的影响。利用siRNA抑制CAFs中的HAS2表达,并分析其对Ca127侵袭能力的影响。 结果：a-SMA表达于CAFs, NFs中几乎无表达。相比NFs, CAFs能够促进Ca127细胞的增殖、侵袭,诱导Ca127细胞上皮-间质转化(EMT)。实时定量RT-PCR结果显示HAS2在CAFs中的表达是NFs的7倍(P0.01)；4-MU在浓度0.4mM时抑常CAFs由HAS2, HAS3的表达而不影响其增殖,并能部分抵消其对肿瘤细胞增殖、侵袭、EMT的作用。NFs与肿瘤细胞间接共培养可诱导肿瘤细胞发生EMT及自身HAS2水平的增高。Ca127在HAS2干扰组的侵袭力显著低于无关序列组(P0.01)。 结论：CAFs促进Ca127细胞增殖、侵袭,诱导肿瘤细胞EMT,高表达HAS2可能是其作用机制之一,抑制肿瘤微环境中CAFs的HAS2功能可能是一条新的抗肿瘤侵袭转移方法。
[Abstract]:The association between CAFs and oncogenesis has been a hot spot in the field of study .

The first part : Expression and significance of hyaluronic acid synthase - 2 in oral squamous cell carcinoma

Objective : To investigate the expression profile of HAS2 in clinical specimens of oral cancer and to analyze its relationship with clinicopathological parameters and 伪 - SMA positive expression .

Methods : The paraffin - embedded tumor tissues of 48 patients with oral cancer who had no history of radiotherapy and chemotherapy were collected , and paraffin - embedded normal mucosa tissues obtained from 16 negative margins were collected . The specimens were stained with immunohistochemical methods .

Results : The positive rate of HAS2 expression in tumor cells was 93 . 8 % ( 45 / 48 ) , and the positive rate was 52.8 % ( 25 / 48 ) .
The positive rate of HAS2 expression in normal oral mucosal epithelial cells was 93 . 8 % ( 15 / 16 ) , and the positive rate was 12.5 % ( 2 / 16 ) in the upper subcutaneous connective tissue . The expression of H 2 2 in tumor stroma was correlated with clinical stage ( 0 . 02 ) , lymph node status ( p = 0.02 ) , and 伪 - SMA positive CAFs ( p0.01 ) .

Conclusion : HAS2 may play an important role in the development , metastasis and tumor matrix activation of oral cancer .

The second part : The role of hyaluronic acid synthase - 2 in the biological behavior of cancer - related fibroblasts

Objective : To investigate the effect of CAFs on the biological behavior of Ca127 cell line in tongue squamous cell carcinoma cell line .

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本文编号：1704971