ALK2对小鼠髁突软骨细胞增殖分化的影响

发布时间：2018-04-08 16:00

  本文选题：髁突软骨细胞　切入点：激活素受体样激酶2　出处：《吉林大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:探讨激活素受体样激酶2对小鼠髁突软骨细胞的增殖及其向软骨方向分化的作用。方法:(1)采用1月龄C57雄性小鼠(体重约12-15 g),采取酶消化法提取髁突软骨细胞,倒置显微镜观察小鼠髁突软骨细胞形态。(2)通过免疫组化染色方法检测COLⅠ、aggrecan、COLⅡ的水平及其在细胞内的分布。采用pellet方法培养髁突软骨细胞,并诱导其向软骨细胞分化。一方面提取细胞m RNA,采用实时定量RT-PCR方法检测软骨标志基因的表达(Sox9、ColⅡ、ColⅩ、ColⅠ),另一方面将细胞团块切片进行HE及甲苯胺蓝染色。(3)采用si RNA沉默小鼠髁突软骨细胞中Alk2基因的表达。流式细胞术检测转染效率,实时定量RT-PCR检测沉默效率,确定最佳沉默条件。(4)转染后1 d、2 d通过MTT法检测髁突软骨细胞的增殖,转染后3 d、7 d通过实时定量RT-PCR方法检测软骨细胞标志基因的表达。结果:(1)倒置显微镜观察体外培养的小鼠髁突软骨细胞形态,细胞呈多角星型。(2)第二代髁突软骨细胞进行细胞爬片免疫组化染色显示COLⅠ强阳性,aggrecan弱阳性,COLⅡ弱阳性。Pellet培养7 d后实时定量RT-PCR检测发现ColⅡ、ColⅩ和ColⅠ表达上调。切片HE显示pellet的表层似纤维细胞,形态扁平,表层下见大量圆形细胞似成熟软骨细胞,球中心见大量缺氧及缺乏营养而至死的细胞团。切片甲苯胺蓝染色发现其表层下的似成熟软骨细胞样细胞呈现异染色。从形态学、免疫表型和基因表达水平鉴定所分离的细胞是髁突软骨细胞。(3)Lipo-si RNA转染小鼠髁突软骨细胞,流式检测技术测转染效率为77.27%。Lipo-Alk2-si RNA转染细胞,实时定量RT-PCR测沉默效率为83%。(4)MTT结果显示Alk2基因沉默后细胞数量增加,实时定量RT-PCR结果显示Alk2基因沉默后软骨细胞相关基因表达下调,并有显著统计学意义。结论:ALK2抑制小鼠髁突软骨细胞的增殖,但是促进小鼠髁突软骨细胞的成软骨向分化。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of activin receptor-like kinase 2 (Activin receptor like kinase 2) on the proliferation and cartilage differentiation of mouse condylar chondrocytes.Methods the chondrocytes of condylar process were extracted by enzyme digestion from 1 month old C57 male mice (weight about 12-15 g).The morphology of mouse condylar chondrocytes was observed by inverted microscope. The level and distribution of COL 鈪，

本文编号：1722316