银杏叶提取物对成骨细胞分化的影响及相关机制探讨

发布时间：2018-04-17 04:05

本文选题：银杏叶提取物 + 成骨分化　；参考：《吉林大学》2017年硕士论文

【摘要】：一、研究背景骨质疏松症(Osteoporosis,OP)是临床上常见的骨代谢疾病,其主要风险是骨脆性增加,骨强度降低,骨折危险度升高。目前,骨质疏松的发病率日渐升高,严重影响中老年人的生活质量。骨质疏松发生于颌骨时可使颌骨骨密度及生物力学性能降低,常造成剩余牙槽嵴吸收加速,导致牙槽骨高度及宽度减小,从而影响义齿的修复。因此有效的防治骨质疏松,减缓牙槽骨的吸收是保证后期口腔种植、可摘局部义齿或者全口义齿修复的顺利进行和美学效果实现的关键。银杏叶是一种植物性雌激素,近年来研究表明其在成骨方面有促进作用。Ritu Trivedi[1]等通过去势法诱导骨质疏松大鼠模型,将银杏叶提取物作用于该大鼠模型后进行体内实验,证明银杏叶提取物能增加骨密度,同时提高成骨细胞的功能活性。Wu Z[2]等通过将银杏叶提取物作用于骨髓间充质干细胞证明银杏叶提取物可以促进干细胞向成骨细胞分化并抑制其向成脂细胞分化,从细胞水平为治疗骨质疏松提供了新的方向。银杏叶提取物对人成骨样细胞MG63分化的影响及其相关分子机制尚未见相关报道。经典Wnt信号通路即Wnt/β-catenin信号通路对多种组织器官的发生、维持等多种生物学过程发挥重要作用[4,5],且其对骨代谢的调控作用已被广泛认识并研究,激活该通路可以促进骨生成,而抑制该通路则会使骨量减少[6]。本实验将观察银杏叶提取物对成骨细胞分化的影响及该过程中经典Wnt信号通路相关因子的表达变化,为银杏叶提取物用于防治骨质疏松提供一定的理论依据。二、研究目的探讨银杏叶提取物对人成骨样细胞MG63分化的影响及其可能的相关分子机制。三、研究内容1、MG63细胞的培养人成骨样细胞MG63培养于完全培养基(含10%Gibco胎牛血清,100IU/m L双抗,DMEM基础培养基),置37℃,5%CO2孵育箱中常规培养,每1-2天换一次液,待细胞长至铺满皿底80%后用0.25%胰酶(含0.02%EDTA)消化传代。2、检测银杏叶提取物对成骨细胞分化的影响将不同浓度的银杏叶提取物作用于MG63细胞,分别于培养第4天和第7天进行碱性磷酸酶(ALP)活性检测,第14天时进行茜素红染色;于第7天时进行实时定量PCR(q RT-PCR)检测骨钙素(OC)、Runx2及一型胶原蛋白A1(COL1A1)的m RNA表达情况。3、检测银杏叶提取物能否通过上调经典Wnt信号通路促进成骨分化将75μg/m L的银杏叶提取物作用于MG63细胞,抑制组加入经典Wnt信号通路抑制剂DKK1,分别于培养7天时进行ALP活性检测,14天时进行茜素红染色;诱导7天时进行q RT-PCR检测OC、Runx2、COL1A1、β-catenin及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的m RNA表达,Western Blot进行检测细胞核蛋白β-catenin和细胞总蛋白β-catenin、cyclin D1的表达变化情况。四、实验结果1、将不同浓度的银杏叶提取物作用于细胞4天、7天时分别进行ALP活性检测,14天时进行茜素红染色,发现随着时间推移各组ALP活性均增加,浓度为50、75、100、150μg/m L的银杏叶提取物均能提高ALP活性及钙结节数量,并均有统计学差异,且在浓度为75μg/m L时最为显著。2、在培养7天时进行q RT-PCR及Western Blot检测,与对照组相比,当加入75μg/m L银杏叶提取物时,β-catenin、cyclin D1 m RNA及蛋白表达水平、核内β-catenin蛋白水平均明显升高,同时OC、Runx2、COL1A1m RNA水平也升高;当同时加入75μg/m L银杏叶提取物和DKK1时,OC、Runx2、COL1A1、β-catenin、cyclin D1 m RNA表达水平及β-catenin、cyclin D1、核内β-catenin蛋白表达水平明显低于单纯银杏叶提取物组,且均有统计学差异。五、实验结论银杏叶提取物对人成骨样细胞MG63的成骨分化具有积极意义,且75μg/m L是最适浓度,其机制可能与经典Wnt通路的激活有关。
[Abstract]:The research background osteoporosis ( OP ) is a common bone metabolism disease in clinic . The main risk is increased bone fragility , decreased bone strength , and increased risk of fracture . The effect of Ginkgo biloba extract on bone mineral density and bone metabolism has not been reported . The effect of Ginkgo biloba extract on the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells has not been reported . The classical Wnt signaling pathway , Wnt / 尾 - catenin signaling pathway , has been widely recognized and studied . The effect of Ginkgo biloba extract on the differentiation of bone - like cells MG63 and its possible molecular mechanism were studied . The levels of 尾 - catenin , cyclin D1 m RNA and protein were significantly increased when 75 渭g / ml Ginkgo biloba extract was added . At the same time , the levels of OC , Runx2 , COL1A1 , 尾 - catenin , cyclin D1 , and COL1A1m were significantly lower .

【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R781

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