RNAi沉默人唾液腺腺样囊性癌SACC-83细胞bcl-2基因的研究

发布时间：2018-04-25 02:16

  本文选题：唾液腺 + 腺样囊性癌　； 参考：《河北医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的: 唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma, SACC）是唾液腺最为常见的恶性肿瘤之一，发生于唾液腺的任何部位。肿瘤恶性程度高，容易沿神经、血管浸润性生长，术后常复发，也可发生肺、骨、脑和肝等远处转移。由于肿瘤的恶性生物学行为，直接威胁患者生命，目前术后尚无有效的治疗方法。 B淋巴细胞瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2, bcl-2）基因是一种抑制细胞凋亡的癌基因，在众多凋亡相关基因中bcl-2是目前最受关注的基因之一。定位于人的滤泡性淋巴瘤和正常B淋巴细胞染色体18号21区，含3个外显子和2个内含子，可编码26kD的bcl-2α和22kD的bcl-2β两种蛋白，其中bcl-2α是抑制凋亡作用发挥的主要蛋白，为线粒体膜的整合蛋白。它最先是在人类滤泡型淋巴瘤中发现，被认为是人类滤泡型淋巴瘤的细胞遗传学标志，但后来研究发现，它在人类肿瘤中有广泛意义。在许多肿瘤组织中，bcl-2基因的表达水平通常会发生改变，它与肿瘤的发生、发展及预后有关。 RANi（RNA interference）即RNA干扰，是目前应用较广的一种基因研究技术，是由外源或内源的双链RNA（double strand RNA, dsRNA）导入细胞而引起的与dsRNA同源的mRNA降解，从而抑制其相应的基因表达。RNAi具有高特异性、高效性、高稳定性、可遗传性、可扩散性和浓度时间依赖性等特点。利用RNAi技术，，在RNA水平特异性抑制特定基因的表达，使特定基因获得功能性丧失，从而成为研究基因功能的良好工具。 本实验采用RNA干扰（RNAi）技术特异性沉默人唾液腺腺样囊性癌SACC-83细胞中的bcl-2基因，探讨基因沉默后SACC-83细胞的形态变化及凋亡情况。 方法： 1重组腺病毒的构建与鉴定：武汉淅玛生物技术公司受本实验室委托，设计并构建重组腺病毒包裹的shRNA-bcl-2，使用双酶切进行鉴定。 2细胞培养：采用含15%胎牛血清的RPMI1640培养液培养人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83。 3细胞转染及滴度测定：将腺病毒介导的shRNA真核表达载体shRNA-bcl-2（沉默组）和shRNA-HK（阴性对照）转染SACC-83细胞，沉默其bcl-2基因的表达（最佳腺病毒滴度MOI为腺病毒

本文编号：1799309