BMP-2和地塞米松对人牙髓细胞增殖和分化的影响

发布时间：2018-05-04 10:01

本文选题：BMP- + 地塞米松　；参考：《中国修复重建外科杂志》2017年06期

【摘要】：目的通过将BMP-2和地塞米松分别及联合作用于体外培养的人牙髓细胞,探讨两者对牙髓细胞增殖和分化能力的影响。方法取25岁以下患者因正畸原因拔出的无病变牙牙髓组织,采用组织块法体外培养人牙髓细胞并传至第3代,行波形蛋白和角蛋白免疫细胞化学染色鉴定。取生长状况良好的第3~5代牙髓细胞分为4组,A、B、C组分别加入100 ng/m L BMP-2、1×10 8 mol/L地塞米松、100 ng/m L BMP-2以及1×10 8 mol/L地塞米松,D组不添加诱导剂作为对照组。培养1、3、5、7 d绘制细胞生长曲线;培养5、7 d行RT-PCR检测成牙本质细胞形成标记基因表达情况,包括牙本质涎磷蛋白(dentin sialophoshoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP-1)、ALP;培养14 d行ALP染色并计算阳性染色面积占总面积比值;培养21 d行茜素红染色并测定562 nm波长处吸光度(A)值。结果成功分离培养呈长梭形的人牙髓细胞,经波形蛋白和角蛋白免疫细胞化学染色鉴定显示符合牙髓细胞的生物学特征。随培养时间延长,各组细胞均逐渐增加,5 d时达峰值,7 d时降至3 d水平。培养5 d,A、B、C组细胞显著多于D组,C组多于A组,A组多于B组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。RT-PCR检测示,培养5 d,A、B、C组ALP、DSPP、DMP-1 m RNA相对表达量均显著高于D组,C组显著高于A、B组,差异均有统计学意义(P0.05);A、B组间比较差异无统计学意义(P0.05)。培养7 d,除A、B、C组DSPP m RNA相对表达量显著高于D组(P0.05)外,其余各组间各基因相对表达量比较差异均无统计学意义(P0.05)。培养14 d ALP染色示,各组可见紫黑色沉淀,其中C组着色程度最深;经半定量测定,C组阳性染色面积占总面积比值显著高于A、B、D组,A、B组高于D组,差异均有统计学意义(P0.05);A、B组间差异无统计学意义(P0.05)。培养21 d茜素红染色示,C组矿化结节呈片状大面积分布,A、B组呈散在分布,D组无矿化结节形成;各组间A值比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 BMP-2对牙髓细胞的增殖作用比地塞米松更明显,两者对牙髓细胞分化作用差异不明显;但与单独应用相比,两者联合应用对牙髓细胞的增殖和分化有明显促进作用。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of BMP-2 and dexamethasone on the proliferation and differentiation of human dental pulp cells in vitro. Methods Human dental pulp cells were cultured in vitro by tissue mass method and passed to the third passage, and identified by vimentin and keratin immunocytochemistry. The third generation of dental pulp cells in good growth condition were divided into 4 groups: group C was treated with 100 ng/m L BMP-2O 1 脳 10 8 mol/L dexamethasone 100 ng/m L BMP-2 and group D with 1 脳 10 8 mol/L dexamethasone as control group. The cell growth curve was drawn on the 7th day of culture and the expression of odontoblast marker gene was detected by RT-PCR on the 5th day of culture. It included dentin sialophosho protein DSPP, dentin matrix protein 1(dentin matrix protein 1, DMP-1 and ALP, ALP staining for 14 days and the ratio of positive staining area to total area, and alizarin red staining for 21 days and absorbance at 562 nm. Results Human dental pulp cells were isolated and cultured successfully and identified by vimentin and keratin immunocytochemical staining. The results showed that these cells accord with the biological characteristics of dental pulp cells. With the increase of culture time, the cells of each group increased gradually and reached the peak value at 5 d and decreased to 3 d level at 7 d. After 5 days of culture, the number of cells in group C was significantly more than that in group C and group A was more than that in group A and group B, and the difference was statistically significant (P 0.05). RT-PCR analysis showed that the relative expression of RNA RNA of ALP DSPPmDMP-1 in group C was significantly higher than that in group C (group D) and that in group A (group A) was significantly higher than that in group A (P < 0.05), and the expression of DMP-1 RNA in group B was significantly higher than that in group C (P < 0.05). All the differences were statistically significant. There was no significant difference between group A and group B (P 0.05). After 7 days of culture, the relative expression of DSPP m RNA was significantly higher in group A than that in group D (P 0.05). On the 14th day of culture, ALP staining showed that there was purple black precipitate in each group, among which group C was the most stained, and the ratio of positive staining area to total area in group C was significantly higher than that in group A and B was significantly higher than that in group D by semi-quantitative measurement, and that in group C was higher than that in group D. All the differences were statistically significant. There was no significant difference between group A and group B (P 0.05, P 0.05, P 0. 05, P 0. 05, P 0. 05, P 0. 05). 21 days after culture, alizarin red staining showed that the mineralized nodules in group C were in the form of flaky large areas, and that in group A, there were no mineralized nodules in group D, and there were significant differences in A values among the groups (P 0.05). Conclusion the effect of BMP-2 on the proliferation of dental pulp cells is more obvious than that of dexamethasone, and there is no significant difference between the two groups in the differentiation of dental pulp cells, but the combined use of BMP-2 and dexamethasone can obviously promote the proliferation and differentiation of dental pulp cells.
【作者单位】：广西医科大学;广西医科大学附属口腔医院儿童牙病科;
【分类号】：R781

【参考文献】

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【共引文献】

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