ERS抑制剂Salubrinal对不同外界刺激诱导的大鼠髁突软骨细胞凋亡变化的影响

发布时间：2018-05-16 21:07

本文选题：大鼠髁突软骨细胞 + 内质网应激　；参考：《南京大学》2014年硕士论文

【摘要】：第一部分Salubrinal抑制ERS反应对周期性牵张刺激诱导的大鼠,髁突软骨细胞凋亡保护作用的研究[目的]研究Salubrinal对周期性牵张刺激诱导下的ERS介导的原代大鼠髁突软骨细胞凋亡的保护作用。[方法]1.选取3周龄SD大鼠,取髁突软骨进行原代培养。对第三代髁突软骨细胞进行相关实验。2.周期性张应变刺激(cyclic strain, CS)为20%,0.5Hz,24h矩形波刺激。Salubrinal+CS组则需用40mol/L Salubrinal预处理30 mmin后再予以同样的周期性张应变刺激。实验分为三组：对照组、周期性张应变刺激组(CS组)、Salubrinal+CS组。采用流式细胞技术检测细胞凋亡率；采用RT-qPCR检测ERS标志分子GRP78、GRP94、CHOP、Caspase-12的mRNA水平改变,Western印迹法检测GRP78、GRP94、CHOP、Caspase-12蛋白水平表达改变。[结果]1.20%周期性张应变刺激处理大鼠髁突软骨细胞24小时后,细胞凋亡率明显上升(P0.05); Salubrinal+CS组细胞凋亡率较CS组显著降低(P0.05)。2.20%周期性张应变刺激诱导大鼠髁突软骨细胞的ERS凋亡相关分子CHOP、 Caspase-12 mRNA水平表达升高,Caspase-12蛋白水平升高：Salubrinal可以逆转这些变化。[结论]1.20%周期性张应变刺激力可以诱导大鼠髁突软骨细胞发生凋亡,ERS凋亡蛋白表达增加。2. Salubrinal可以通过抑制大鼠髁突软骨细胞发生ERS,对20%周期性张应变刺激诱导的凋亡起保护作用。第二部分Salubrinal抑制ERS反应对低氧刺激诱导的大鼠髁突软骨细胞凋亡保护作用的研究[目的]研究ERS抑制剂Salubrinal对低氧诱导刺激下大鼠髁突软骨细胞(所有的软骨细胞都特指大鼠髁突软骨细胞)凋亡的保护作用。[方法]1.体内实验部分：选取6周龄SD大鼠,戴用特殊设计的矫形器(专利号：201120210396.4)对其髁突软骨施加压力刺激,单纯加力组作用时间7天,Salubrinal预处理组则在加力关节腔局部注射Salubrinal。不戴矫形器的SD大鼠作为对照组,免疫组化检测加力后髁突关节软骨组织的缺氧诱导因子Hif-1α的表达改变。2.体外实验部分：选取3周龄SD大鼠,取髁突软骨进行原代细胞培养,所有实验均使用P3代髁突软骨细胞。3.实验分为三组：对照组、低氧刺激组、Salubrinal+低氧刺激组,其中低氧刺激为5%低氧24h和1%低氧30h两组设计,Salubrinal的预处理需在低氧刺激前30min开始；流式细胞术检测各组的细胞凋亡率。4.根据流式结果选取合适的低氧刺激强度处理细胞。采用RT-qPCR检测各组细胞的ERS标志分子GRP78、GRP94、CHOP、Caspase-12mRNA表达的改变,Western印迹法检测各组细胞的ERS标志分子GRP78、GRP94、CHOP、Caspase-12及Hif-1α蛋白表达的改变。[结果]1.大鼠髁突软骨在压应力刺激作用下,缺氧诱导因子Hif-la的表达水平明显上升(P0.05), Salubrinl预处理组较单纯加力组Hif-la的表达水平明显降低(P0.05)。2.5%低氧刺激24h后,大鼠髁突软骨细胞凋亡率无明显差异(P0.05)； 1%低氧刺激30h,大鼠髁突软骨细胞凋亡上升,Salubrinal可缓解低氧刺激造成的大鼠髁突软骨细胞凋亡。3.正常培养条件Hif-1α不表达,1%低氧刺激30h后Hif-1α仪蛋白表达,且Salubrinal预处理降低了缺氧引起的Hif-1α表达升高(P0.05)。1%低氧刺激30h后,大鼠髁突软骨细胞中GRP78、GRP94、CHOP、Caspase-12的mRNA和蛋白表达水平显著性升高(P0.05)。Salubrinal+1%低氧组软骨细胞GRP78、GRP94、CHOP、Caspase-12的mRNA和蛋白水平上的表达较1%低氧组显著降低(P0.05)。[结论]1.大鼠髁突关节软骨在压应力刺激作用下处于缺氧状态。2.1%低氧刺激作用30h可以诱导大鼠髁突软骨细胞发生ERS,从而导致凋亡。3. Salubrinal可以通过抑制大鼠髁突软骨细胞发生ERS,对体内外低氧刺激诱导的凋亡起保护作用。
[Abstract]:In the first part , the protective effects of ERS reaction on the apoptosis of condylar cartilage cells induced by cyclic stretch stimulation were studied . The experimental results were as follows : 3 - week - old SD rats were selected to carry out primary culture of condylar cartilage .
The levels of GRP78 , GRP94 , CHOP and Caspase - 12 were detected by RT - qPCR . The levels of GRP78 , GRP94 , CHOP and Caspase - 12 were detected by Western blot . The protective effects of ERS on the apoptosis of condylar cartilage cells in rats induced by hypoxia were studied .
The expressions of GRP78 , GRP94 , CHOP , Caspase - 12 and Hif - 1伪 were detected by RT - qPCR . The expression levels of GRP78 , GRP94 , CHOP , Caspase - 12 and Hif - 1伪 protein in each group were significantly decreased by RT - qPCR ( P0.05 ) .
The expression of GRP78 , GRP94 , CHOP , Caspase - 12 mRNA and protein in condylar cartilage cells increased significantly ( P0.05 ) . By inhibiting the occurrence of ERS in the condylar cartilage cells of rats , the apoptosis of rat condylar cartilage cells induced by external hypoxic stimulation could be protected .
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R782

【共引文献】