乏氧对人口腔鳞状细胞癌细胞中叉头蛋白P3表达的影响及其机制

发布时间：2018-05-18 06:11

  本文选题：乏氧 + 叉头蛋白P　； 参考：《吉林大学学报(医学版)》2017年03期

【摘要】：目的:观察乏氧对人口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中叉头蛋白P3(FOXP3)表达的影响,阐明乏氧调控FOXP3表达的表观遗传学机制。方法:选取人OSCC细胞株FaDu和OECM-1细胞,常氧和乏氧条件下培养18h。采用实时定量PCR方法检测细胞中FOXP3mRNA的相对表达水平,Western blotting法检测FaDu和OECM-1细胞中FoxP3蛋白表达水平,染色质免疫沉淀-定量PCR(ChIP-qPCR)法检测FOXP3基因启动子上组蛋白修饰H3K4乙酰化(H3K4ac)、H3K4三甲基化(H3K4me3)和H3K27三甲基化(H3K27me3)水平。采用组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)基因沉默的FaDu细胞,以实时定量PCR和ChIP-qPCR法检测FaDu细胞中HDA3mRNA相对表达水平和FOXP3mTNA表达抑制率。结果:与常氧条件比较,乏氧条件下FaDu和OECM-1细胞中FOXP3 mRNA相对表达水平均明显降低,分别下降65.6%(P0.01)和75.7%(P0.01);Western blotting检测,乏氧条件下FaDu和OECM-1细胞中FOXP3蛋白表达水平明显低于常氧条件下;染色质免疫沉淀实验,与常氧条件比较,乏氧条件下FaDu细胞中FOXP3基因启动子上的H3K4ac和H3K4me3水平明显降低(P0.01),而H3K27me3水平无明显差异。与无HDAC3基因沉默的FaDu细胞比较,HDAC3基因沉默的FaDu细胞中缺氧诱导的FOXP3启动子上H3K4ac和H3K4me3表达抑制率明显降低(P0.05),缺氧诱导的FOXP3mRNA相对表达抑制率降低(P0.05)。结论:乏氧可通过HDAC3介导的FOXP3基因启动子上H3K4ac水平下调而抑制OSCC细胞中FOXP3的表达。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of hypoxia on the expression of forkhead protein P3FXP3 in human oral squamous cell carcinoma (OSCC) cells and to elucidate the epigenetic mechanism of hypoxia regulating the expression of FOXP3. Methods: human OSCC cell lines FaDu and OECM-1 were cultured for 18 h under normoxic and hypoxic conditions. The relative expression level of FOXP3mRNA was detected by real-time quantitative PCR assay and the expression of FoxP3 protein in FaDu and OECM-1 cells was detected by Western blotting assay. Chromatin immunoprecipitation-quantitative PCRP-qPCRmethod was used to detect the levels of histone modified H3K4 acetylated H3K4 H3K4acactyl (H3K4 trimethylated H3K4me3) and H3K27 trimethylated h3K27me3 (H3K27me3) on the promoter of FOXP3 gene. FaDu cells silenced by histone deacetylase 3 (HDAC3) gene were used to detect the relative expression of HDA3mRNA and the inhibition rate of FOXP3mTNA expression in FaDu cells by real-time quantitative PCR and ChIP-qPCR. Results: compared with normoxic conditions, the relative expression of FOXP3 mRNA in FaDu and OECM-1 cells decreased significantly under hypoxia, and decreased by 65.6% (P 0.01) and 75.7% (P 0.01), respectively. The expression of FOXP3 protein in FaDu and OECM-1 cells under hypoxia was significantly lower than that under normoxic condition. In chromatin immunoprecipitation assay, compared with normoxic conditions, the levels of H3K4ac and H3K4me3 on the promoter of FOXP3 gene in FaDu cells were significantly lower than those under normoxic conditions, but there was no significant difference in H3K27me3 level. Compared with FaDu cells without HDAC3 gene silencing, the inhibition rate of H3K4ac and H3K4me3 expression on FOXP3 promoter induced by hypoxia was significantly lower than that of FaDu cells without HDAC3 gene silencing, and the relative expression inhibition rate of FOXP3mRNA induced by hypoxia was lower than that of FaDu cells induced by hypoxia. Conclusion: hypoxia can inhibit the expression of FOXP3 in OSCC cells by down-regulating the level of H3K4ac on the promoter of FOXP3 gene mediated by HDAC3.
【作者单位】： 浙江省肿瘤医院放疗科十九病区;杭州师范大学医学院生物化学与分子生物学教研室;
【基金】：国家自然科学基金资助课题(81301850) 浙江省教育厅科研项目资助课题(Y201328812)
【分类号】：R739.8

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本文编号：1904728