雌二醇对SD大鼠髁突软骨细胞增殖分化影响的实验研究

发布时间：2018-06-27 17:03

  本文选题：髁突软骨细胞 + 雌二醇　； 参考：《昆明医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：[目的]髁突软骨细胞(mandibular condylar chondrocyte,MCC)的增殖、分化是髁突适应性改建的基础。研究表明,髁突软骨是雌激素作用的靶器官,雌激素可与相应受体特异性结合,从而发挥一系列生物学效应。雌激素对MCC增殖分化的影响及作用机制尚不清楚,因此,本课题通过建立SD大鼠MCC体外培养模型,评估雌二醇(Estradiol,E2)对MCC增殖分化的影响,为研究E2对MCC的生物学特性及颞下颌关节疾病的发病机制提供一定的理论依据。[方法]分离出生1-3d的SD大鼠双侧髁突软骨,采用胰酶和Ⅱ型胶原酶联合消化的方法获取MCC进行体外培养,建立MCC体外培养模型。通过倒置显微镜进行形态学观察,采用甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色对MCC进行鉴定;取第 2 代 MCC,加入 10-12mol/L、10-9mol/L、10-6mol/L 的 E2(设置添加PBS为空白对照组),MTT法及流式细胞计量术分别检测在24h、48h、72h,MCC的增殖及细胞周期的变化;运用RT-PCR技术检测不同浓度E2诱导72h后,MCC中 Sox9、Co12αl、Runx2mRNA 的表达变化。[结果]1.原代MCC约24h贴壁完成,呈三角形、多角形,7d长满瓶底,单层呈“铺路石”状。传代后,细胞形态均一,贴壁时间缩短,约5d可长满瓶底。传至第4代以后,成纤维样细胞比例逐渐增加,细胞开始出现去分化现象;传至第6-7代,细胞完全去分化,呈“树枝”状、“鱼群”状。第2代MCC生长曲线呈S型,甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色均呈阳性。2.不同浓度 E2 作用 MCC24h、48h、72h,10-12mol/L 及 10-9mol/LE2 促进 MCC的增殖,以10-9mol/L促进作用最强,10-6mol/LE2抑制MCC的增殖,并且促进/抑制作用随时间的延长而更加显著。作用24h,随E2浓度的增高,S期及G2/M期细胞比例逐渐增高,GO/G1期细胞比例逐渐降低;随作用时间的增长,S期,G2/M期比例逐渐降低,G0/G1期比例渐增高,发生GO/G1期阻滞。3.不同浓度 E2 作用 72h,MCC Sox9mRNA 的表达量,10-9mol/L 组及 10-12mol/L组高于对照组,10-6mol/L组Sox9 mRNA表达量低于对照组。其中,10-9mol/L组与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05);其余两组与对照组相比,差异均无统计学意义(P0.05)。Col2α1 mRNA的表达量,实验组与对照组相比差异均无统计学意义。Runx2 mRNA的表达量,10-9mol/L和10-12mol/L组均低于对照组,10-6mol/L组高于对照组。其中,10-9mol/L组与对照组相比差异有统计学意义(P0.05),其余两组与对照组相比,差异均无统计学意义(P0.05)。[结论]1.应用本实验方法建立MCC体外培养模型成功有效。从原代细胞纯化及防止细胞去分化角度考虑,宜选用第2代或第3代MCC。2.E2对MCC的增殖具有浓度和时间效应关系,其机制与E2对MCC细胞周期的调控有关。3.E2通过调节Sox9及Runx2的表达介导MCC的成熟分化;适宜浓度的E2对维持软骨细胞表型具有一定意义;随浓度的增加,可能对促进MCC成熟肥大化起到一定作用。
[Abstract]:[objective] the proliferation and differentiation of condylar chondrocyteal cells (mandibular condylar chondrocyteus) are the basis of condylar adaptive remodeling. It has been shown that condylar cartilage is the target organ of estrogen, and estrogen can bind to the corresponding receptor, thus exerting a series of biological effects. The effect of estrogen on the proliferation and differentiation of MCC is not clear. Therefore, the effect of estradiol E 2 on the proliferation and differentiation of MCC was evaluated by establishing a rat model of MCC culture in vitro. It provides a theoretical basis for studying the biological characteristics of MCC and the pathogenesis of temporomandibular joint disease. [methods] bilateral condylar cartilage was isolated from SD rats born 1 to 3 days. MCC was obtained by combined digestion of trypsin and collagenase 鈪，

本文编号：2074611