不同fimA型牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白对人脐动脉平滑肌细胞生物学行为的影响

发布时间：2018-10-13 07:27

【摘要】：目的:分析比较Ⅰ、Ⅱ fimA型牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白(P.gingivalis-rFimA)对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)的增殖、迁移能力以及表型转化的影响,探讨不同fimA型P.gingivalis-rFimA的侵袭在动脉粥样硬化(As)发生发展过程中的可能作用。方法:1、体外培养的HUASMCs,加入96孔培养板,采用CCK-8检测不同终浓度的P.gingivalis-rFimA(0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)在2h、8h、24h、48h对平滑肌细胞增殖的影响,酶标仪450nm处测定各组OD值,并确定rFimA促增殖效应的最适浓度。2.采用上述确定最适浓度10μg/ml的P.gingivalis-rFimA,与HUASMCs共培养2h、8h、24h、48h后,通过Transwell细胞迁移实验检测HUASMCs的迁移情况,透射电镜观察细胞超微结构,流式细胞术检测收缩型标志蛋白平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC)和合成型标志细胞视黄醇结合蛋白-1(cellular retinol bindingprotein-1,CRBP-1)的表达变化情况。结果:1、在不同时间点,Ⅰ型和Ⅱ型P.gingivalis-rFimA组的促HUASMCs增殖作用均比阴性对照组强,差异有统计学意义(P0.05)。随着浓度的增加Ⅰ型和Ⅱ型P.gingivalis-rFimA组的促HUASMCs增殖作用也增强(P0.05)。在同一刺激浓度和作用时间点,Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激HUASMCs增殖作用强于Ⅰ型P.gingivalis-rFimA(P0.05)。2、在不同时间点,Ⅰ和Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激组的HUASMCs迁移细胞数目均比阴性对照组多,差异有统计学意义(P0.05)。随着时间延长,各组的HUASMCs迁移细胞数目增多;2h时,Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激组的HUASMCs迁移细胞数目要多于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA组,但差异无统计学意义(P0.05);在8h、24h和48h时,Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激组的HUASMCs迁移细胞数目要多于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA组,差异均有统计学意义(P0.05)。3、通过电镜观察,在Ⅰ、Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激组2h、8h时HUASMCs出现明显的粗面内质网、糖原、线粒体、吞噬体和溶酶体的增多,细胞器有不同程度的肿胀;Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激组在各个观察点均可观察到脂滴的出现;Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激组则在24h和48h时,细胞器开始溶解、大部分细胞结构出现破坏。4、在不同时间点,Ⅰ和Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激后,均能观察到HUASMCs的合成型标志分子CRBP-1的表达上调,收缩型标志分子SM-MHC的表达下调,而Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA组上调CRBP-1表达的作用强于于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA组,在24h和48h Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA组下调SM-MHC表达的作用强于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA组(P0.05)。结论:Ⅰ、Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA均能刺激平滑肌细胞使其表型由收缩型转化为具有分泌功能的合成型,并促进其增殖和迁移能力,提示Ⅰ、Ⅱ fimA型P.gingivalis及其毒力因子FimA的感染和侵袭可能会引起平滑肌细胞生物学行为的异常,从而在As的发生发展进程中发挥一定作用;而不同fimA型P.gingivalis-rFimA对平滑肌细胞的促增殖、迁移和表型转换作用存在一定的差异。
[Abstract]:Aim: to compare the effects of P.gingivalis-rFimA of type 鈪，

本文编号：2267782