【摘要】：龋病是人类最常见的细菌感染性疾病之一,严重危害口腔健康。防龋亚单位疫苗是预防龋病的有效途径。但如何提高防龋亚单位疫苗的免疫效果仍是一个重要课题。鞭毛蛋白是TLR5的配体,表现出良好的佐剂活性,能有效激活树突状细胞的MyD88依赖型信号通路,诱导细胞因子和趋化因子的表达,促进T、B淋巴细胞向引流淋巴结的迁移,从而增加抗原特异性淋巴细胞对抗原的识别。PIKA与AddaVax佐剂也表现出较好的佐剂活性,已被应用于许多疫苗研究。 本研究将鞭毛蛋白、PIKA及AddaVax三种佐剂分别与防龋亚单位疫苗PAc联合以不同免疫途径接种小鼠,探索含鞭毛蛋白、PIKA及AddaVax佐剂的防龋亚单位疫苗的免疫效果,并分析不同佐剂和接种途径对防龋亚单位疫苗免疫效应的影响。 目的：研究含鞭毛蛋白、AddaVax及PIKA佐剂的防龋亚单位疫苗的免疫保护效应。 材料与方法： 1.分别采用鞭毛蛋白、AddaVax及PIKA佐剂联合防龋亚单位疫苗PAc以不同给药途径免疫小鼠,并在免疫前及免疫后2、4、6、8、10、12、16及20周收集小鼠的唾液和血液样本,应用ELISA技术检测样本中特异性抗PAc IgA和抗PAc IgG抗体的浓度,并对血清中特异性抗体亚型IgG1和IgG2a进行检测,分析IgGl/IgG2a匕值； 2.在末次免疫后8周处死小鼠,取脾,进行脾细胞刺激试验,提取脾细胞总RNA,用RT-qPCR技术检测脾细胞中的IL-4及IFN-γ mRNA的转录水平； 3.收集脾细胞上清,检测上清中细胞因子IL-4及IFN-7的分泌水平。 结果： 1.在第4和6周时,AddaVax+PAc颊黏膜下注射组与PIKA+PAc滴鼻组唾液抗PAc IgA水平无统计学差异(p0.05),但该两组抗体水平均显著高于其他各组(p0.05)。第8周时,PIKA+PAc滴鼻组抗体水平显著高于其他各组(p0.01)。 2.所有组的血清抗PAc IgG抗体水平均在第6周时达高峰。在除第0周外的其他检测时间点,AddaVax+PAc皮下注射组和AddaVax+PAc颊黏膜下注射组小鼠血清抗PAc IgG水平均高于其他四组(p0.01)。AddaVax+PAc皮下注射组与Adda Vax+PAc颊黏膜下注射组比较,除第0、8、10和16周外,其余时间点都有显著性差异(p0.05),尤其在抗体水平高峰第6周(p0.01)。各免疫组第0周时(接种疫苗前)血清IgGl/IgG2a较低,自免疫后第2周呈起逐渐升高的趋势。 3.经PAc刺激48h后,脾细胞IL-4mRNA转录水平在各实验组之间无统计学差异(p0.05),但均低于阳性对照组(p0.01);脾细胞IFN-γ mRNA转录在各实验组之间无统计学差异(p0.05),但均低于阳性对照组(p0.01)。 4.经PAc刺激48h后,各实验组的脾细胞上清IL-4水平均高于阴性对照组(空白未刺激组)(p0.05)；AddaVax+PAc皮下注射组的IL-4水平显著高于PIKA+PAc滴鼻组(p0.01),且此两组的IL-4水平均高于阳性对照组(conA组)(p0.01)。所有实验组及对照组脾细胞上清的IFN-γ水平之间无统计学差异(p0.05)。 结论：以滴鼻途径,不同佐剂分别与防龋亚单位疫苗PAc共同免疫小鼠后所诱导的免疫效应的影响不一样：PIKA对防龋亚单位疫苗PAc有较好的黏膜佐剂效应,可有效促进小鼠唾液特异性IgA浓度的升高。经AddaVax+PAc以不同免疫途径接种小鼠时,产生不同的免疫效应；经注射免疫途径所产生的免疫效应显著优于鼻黏膜滴注途径。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R781.1
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本文编号：2323953
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