细菌感染影响牙周组织细胞表达环鸟苷-腺苷合成酶的实验研究

发布时间：2018-11-23 12:41

【摘要】：目的研究侵入牙周组织细胞内的细菌对细胞表达环鸟苷-腺苷合成酶(c GAS)的影响。方法将SYTO9标记的牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)以感染复数(MOI)为10与人牙周膜细胞(hPDLCs)共培养24 h后,使用激光共聚焦显微镜观察P.gingivalis对hPDLCs的侵袭情况,并应用荧光标记活细胞筛选(FACS)分选出被P.gingivalis入侵的hPDLCs,利用实时定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)和Western blot对hPDLCs中c GAS的表达变化进行检测。此外还利用免疫组织化学技术对细菌感染性牙龈组织和正常牙龈组织中c GAS表达定位和表达水平变化进行分析。结果激光共聚焦显微镜下观察,P.gingivalis和hPDLCs共培养24 h后,几乎所有的细胞内都可观察到绿色荧光;被P.gingivalis感染的hPDLCs中c GAS表达水平明显上调;在牙龈组织中c GAS主要在上皮细胞和上皮下组织中的炎性细胞中表达;且细菌感染性的牙龈组织中c GAS的表达水平明显高于正常牙龈组织。结论侵入hPDLCs内的活体P.gingivalis,可以明显上调细胞中c GAS的表达;且在细菌感染的炎性牙龈组织中c GAS的表达也明显升高。该结果提示c GAS可能参与了牙周组织细胞中细菌来源的病原ds DNA的识别。
[Abstract]:Objective to study the effect of bacteria invading periodontal tissue on the expression of cyclic guanosine adenosine synthase (c GAS). Methods SYTO9 labeled porphyromonas gingivalis (P.gingivalis) was co-cultured with human periodontal ligament cells (hPDLCs) for 24 h with complex (MOI) of 10. The invasion of hPDLCs by P.gingivalis was observed by confocal laser microscopy. The expression of c GAS in hPDLCs was detected by real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (Q RT-PCR) and Western blot. The (FACS) was screened by fluorescent labeled living cells and the hPDLCs, which had been invaded by P.gingivalis was detected by real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (Q RT-PCR) and Western blot. The expression localization and expression level of c GAS in bacterial infected gingival tissues and normal gingival tissues were analyzed by immunohistochemistry. Results under confocal laser microscope, green fluorescence was observed in almost all cells after co-culture of P.gingivalis and hPDLCs for 24 h, and c GAS expression in hPDLCs infected with P.gingivalis was up-regulated. In gingival tissue, c GAS was mainly expressed in epithelial cells and inflammatory cells in subcutaneous tissue, and the expression level of c GAS in bacterial infective gingival tissue was significantly higher than that in normal gingival tissue. Conclusion in vivo P.gingivalis invading into hPDLCs can significantly up-regulate the expression of c GAS and increase the expression of c GAS in inflammatory gingival tissues infected by bacteria. These results suggest that c GAS may be involved in the identification of pathogenic ds DNA derived from bacteria in periodontal tissue cells.
【作者单位】： 南方医科大学南方医院口腔科;南方医科大学口腔医学院;
【基金】：国家自然科学基金(81500870) 南方医科大学南方医院院长基金(2013C017)~~
【分类号】：R781.4

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本文编号：2351654