单羧酸转运体4（MCT4）对口腔鳞状细胞癌生物学行为的影响及其分子机制的初步研究

发布时间：2018-12-11 13:32

【摘要】：口腔鳞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤。临床上,淋巴道转移或远处转移是影响口腔鳞癌患者预后的重要因素,而肿瘤局部高浓度的乳酸聚集是淋巴道或远处转移的一个重要因素。单羧酸转运体4(Monocarboxylate transporter4, MCT4)是单羧酸转运体家族的一员,在肿瘤糖酵解中,其主要功能是将细胞内乳酸转运到胞外,维持肿瘤细胞内外环境的稳定。最近发现,MCT4在多种肿瘤中高表达,并与肿瘤的预后有一定关系。但在口腔鳞癌中,MCT4的作用研究很少。研究目的： 1、观察MCT4在口腔鳞癌中的表达,评价MCT4表达水平与临床病理以及预后的关系； 2、分析MCT4对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响； 3、初步探讨MCT4影响口腔鳞癌细胞增殖、侵袭能力变化的分子生物学机制。材料与方法： 1、MCT4在口腔鳞癌的表达,与临床病理以及预后的关系：应用免疫组织化学染色的方法检测99例口腔鳞状细胞癌标本中MCT4的表达部位、范围；统计分析MCT4表达水平与患者的临床病理因素的关系,以及MCT4的表达与患者预后的关系。 2、MCT4在口腔鳞状细胞癌中生物学作用的研究：应用Western Blot方法检测MCT4在口腔鳞癌细胞HN4、HN6、HN12、Cal27、SCC9和SCC25-中的表达水平；RT-RCR和Western Blot方法分别检测siRNA干扰后细胞中MCT4mRNA水平和蛋白水平的表达变化；通过乳酸含量测定实验、CCK8实验、Transwell细胞迁移侵袭实验以及划痕实验分别测定MCT4表达被抑制后,HN4和HN6乳酸转运能力、增殖能力及迁移侵袭能力的变化。 3、MCT4影响口腔鳞癌细胞增殖及迁移侵袭能力的分子学机制：应用Western Blot检测siRNA干扰后口腔鳞癌细胞HN4和HN6中integrin β4以及AKT, FAK-Tyr397, FAK-Tyr925, SRC, MEK和ERK1/2本底及磷酸化蛋白的表达水平的变化；检测siRNA干扰后HN4和HN6中E-cadherin, N-cadherin和vimentin表达水平的变化。结果： 1、免疫组织化学染色显示：99例口腔鳞状细胞癌标本中均检测出MCT4表达,MCT4主要表达于肿瘤细胞的细胞膜上和/或胞浆；MCT4的表达与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移、远处转移、复发有关；生存分析表明MCT4高表达组总体生存期以及无瘤生存期都明显低于低表达组患者(p＜0.001)。多因素生存分析证实MCT4是影响口腔鳞癌患者总体生存(p=0.002)和无瘤生存(p=0.003)的独立因素。 2、MCT4在口腔鳞癌细胞系HN4、HN6和SCC9中高表达,Ca127和SCC25中度表达,HN12低表达；在高表达MCT4的口腔鳞癌细胞HN4和HN6中加入MCT4特异性siRNA后,细胞中MCT4mRNA和蛋白表达水平均显著下降,而胞膜上另一个重要的单羧酸转运体MCT1的mRNA水平未见明显改变； MCT4被特异性沉默后,HN4和HN6的乳酸转运能力、增殖能力、迁移能力以及侵袭能力均显著下降。 3、口腔鳞癌细胞HN4和HN6中特异性沉默MCT4后integrin (34及磷酸化的AKT,FAK-Tyr397, FAK-Tyr925, SRC, MEK和ERK1/2的表达水平均显著下降,而其本底蛋白水平没有明显改变;RNA干扰后,HN4、HN6中E-cadherin的表达水平升高,N-cadherin的表达水平下降,而vimentin的表达水平没有明显变化。结论： 1、MCT4在口腔鳞状细胞癌组织和细胞系中均呈高表达,与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移、远处转移、复发与否及患者的生存率密切相关。 2、MCT4被特异性沉默后,口腔鳞癌细胞的增殖及迁移侵袭能力也显著下降。 3、MCT4可能通过integrin β4-SRC-FAK-MEK-ERK通路影响口腔鳞癌细胞增殖及迁移侵袭能力;MCT4可影响肿瘤细胞发生上皮细胞-间充质转化。
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【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.85

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