弱激光对大鼠正畸牙牵张侧牙周膜细胞成骨分化及MAPK信号通路的作用研究

发布时间：2018-12-28 16:00

【摘要】：目的:通过建立改良的大鼠正畸牙移动模型,以弱激光照射大鼠正畸牙牙周组织,探讨弱激光照射对牵张侧牙周膜细胞成骨分化的促进作用以及对MAPK信号通路的影响,为弱激光在口腔正畸固定矫治中的应用提供理论基础。方法:1.改良大鼠牙移动模型的建立及弱激光照射43只健康Wistar大鼠,雄性、6周龄,随机选取3只为空白组,其余大鼠上颌左右两侧随机分为0s组、5s组、10s组和20s组。将大鼠两颗上前牙整体作为支抗,以40g的力牵引双侧上颌第一磨牙向近中移动。空白组不作处理。双侧正畸加力模型建成后,使用波长650nm,功率100mw弱激光治疗仪分别以能量密度15.92J/cm2、31.84J/cm2、63.68J/cm2对上颌第一磨牙的颊侧、腭侧、近中侧牙槽粘膜进行照射,0天-6天每天一次。0s组只加力,不照射。2.于激光照射后的第1d、3d、5d、7d、14d各取8只大鼠使用4%中性甲醛溶液经心脏灌注处死,空白组随1d组一块处死,取包含上颌第一磨牙的牙槽骨制作石蜡切片并进行HE染色,400倍光镜下对牵张侧牙周膜成骨细胞(osteoblast,OB)计数,使用统计学软件SPSS17.0进行统计分析。3.取各组的组织蜡块切片进行免疫组织化学染色。400倍光镜下在每张切片中正畸牙牙周膜张力区随机选择5个视野,采用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件计算积分光密度值。使用统计学软件SPSS17.0进行统计分析比较0s组、5s组、10s组ALP、Runx2及0s组、5s组的p-ERK1/2、p-JNK的表达情况,并做相关性分析。结果:1.在加力3d时,0s组、5s组、10s组和20s组OB数目均有增加,5s组、10s组OB数量最多,较0s组和20s组差异有统计学意义(P0.05)。5d时,各组OB数目进一步增加,5s组10s组20s组0s组;除0s组跟20s组比较没有统计学差异外,其余各组两两比较均有统计学差异(P0.05)。7d时,5s组和10s组OB数目达到峰值,5s组10s组,差异有统计学意义(P0.05)。14d时,5s组和10s组OB数目开始减少,同时0s组和20s组OB数目达到峰值,但低于5s组和10s组;5s组10s组20s组0s组,除5s组跟10s组没有统计学差异外,其余均有统计学差异(P0.05)。2.alp主要在成骨细胞以及成牙骨质细胞的胞浆及间质中表达。0s组3d、5d时alp表达较强,5d时最强;5s组、10s组1d、3d、5d均有大量的alp表达;3d时10s组达到峰值,iod值10s组5s组0s组,差异有统计学意义(p0.05);5d时0s组、5s组达到峰值,10s组迅速下降低于0s组,iod值5s组0s组10s组,差异有统计学意义(p0.05)。runx2主要在牙髓细胞和牙周膜细胞胞核中表达。在1d、3d、5d、7d时各组的表达逐渐增强,14d时有所下降。1d、3d时,各组iod值差异不大。5d时,5s组和10s组iod值大于0s组(p0.05),差异有统计学意义(p0.05);5s组和10s组之间没有统计学差异。7d时,iod值5s组10s组0s组,但没有统计学差异。14d时,iod值5s组10s组0s组,三组两两比较均有统计学差异(p0.05)。3.p-erk1/2及p-jnk在牙周膜细胞胞核和胞质内表达。0s组、5s组5d时p-erk1/2阳性细胞数量较1d、3d时增多,染色变深,5s组阳性表达最显著;7d时0s组阳性染色进一步增强,5s组则减弱;14d两组阳性染色均较7d时减弱。3d、5d时iod值5s组0s组,差异有统计学意义。1d、3d,14d时,p-jnk在0s组呈弱阳性表达,5s组较0s组阳性表达显著;5d、7d阳性染色加深;5s组7d时阳性最强,0s组5d时阳性最强;各时间点iod值5s组0s组,除5d时差异无统计学意义(p0.05)外,其余时间点差异均有统计学意义(p0.05)。4.相关性分析显示:alp、runx2与p-erk1/2的表达呈正相关(r=0.399、0.799,p=0.024、0.0000.01);runx2与p-jnk的表达呈正相关(r=0.794,p=0.0000.01);alp与p-jnk的表达无显著相关性,(r=0.262,p=0.1480.05)。结论:1.llli(能量密度15.92j/cm2和31.84j/cm2)能够促进大鼠正畸牙牵张侧牙周组织改建及成骨细胞分化;前者的作用更显著。2.llli(能量密度15.92j/cm2和31.84j/cm2)能够增强牵张侧牙周膜成骨分化相关蛋白alp、runx2的表达,前者的作用更显著。3.15.92j/cm2的llli能够增强牵张侧牙周膜细胞p-erk1/2、p-jnk的阳性表达。erk1/2、jnk信号通路可能参与了弱激光照射促进正畸牵张侧牙周膜细胞成骨分化及骨改建过程。
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【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R783.5

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