p38丝裂原活化蛋白激酶在炎症微环境作用下对牙周膜干细胞成骨分化的影响

发布时间：2018-12-31 21:50

【摘要】：目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在慢性牙周炎组织来源的牙周膜干细胞中的表达及其对炎症微环境作用下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法 2012年10月至2013年5月收集中国人民解放军总医院口腔科因治疗需要拔除的无龋前磨牙及慢性牙周炎牙齿,培养正常及炎症微环境下的牙周膜干细胞(H-PDLSCs,P-PDLSCs)。采用酶联免疫吸附试验及实时定量PCR检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的分泌及基因表达量,免疫荧光检测p38在细胞内的表达,Western blot法检测两种细胞成骨诱导7 d后p38及磷酸化p38(p-p38)的表达。使用p38 MAPK特异性抑制剂SB-203580干扰后体外成骨诱导7 d,实时定量PCR检测细胞成骨关键基因Runx2和碱性磷酸酶(ALP)的基因表达水平,成骨诱导21 d后茜素红染色检测PDLSCs的矿化结节形成情况。结果 P-PDLSCs的TNF-α和IL-1β分泌量均显著高于H-PDLSCs(68.80±6.70比34.10±3.07,P=0.001;57.10±4.23比26.90±2.58,P=0.000)。P-PDLSCs中TNF-α的基因表达水平较H-PDLSCs上升1.4倍(P=0.011),IL-1β的基因表达水平也上升1.7倍(P=0.009)。P-PDLSCs的p38表达量高于H-PDLSCs;成骨诱导后两种PDLSCs中的p-p38表达均升高,但p38表达水平有所降低。SB-203580干扰后PDLSCs的Runx2和ALP表达水平显著降低(H-PDLSCs:P=0.044、0.036;P-PDLSCs:P=0.017、0.004),矿化结节形成数量减少。结论在慢性炎症微环境中,p38 MAPK参与细胞的炎性反应,抑制p38后炎症微环境作用下PDLSCs的成骨分化能力也被显著抑制。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) in periodontal ligament stem cells derived from chronic periodontitis and its effect on osteogenic differentiation of periodontal ligament stem cells under inflammatory microenvironment. Methods from October 2012 to May 2013, periodontal ligament stem cells (P-PDLSCs) of periodontal ligament stem cells (H-PDLSCsPPDLSCs) were collected from the Department of Stomatology of the Chinese people's Liberation Army General Hospital in order to remove the teeth without caries and chronic periodontitis, and to culture the periodontal ligament stem cells (H-PDLSCsPPDLSCs) in normal and inflammatory environment. The secretion and gene expression of tumor necrosis factor (TNF) 伪 and interleukin (IL) 1 尾 were detected by enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) and real time quantitative PCR. The expression of p38 was detected by immunofluorescence. The expression of p38 and phosphorylated p38 (p-p38) were detected by Western blot. The expression of Runx2 and alkaline phosphatase (ALP), the key genes of osteogenesis, were detected by real-time quantitative PCR at 7 days after osteogenesis induction was induced by p38 MAPK specific inhibitor SB-203580. 21 days after osteogenesis induction, alizarin red staining was used to detect the formation of mineralized nodules in PDLSCs. Results the secretion of TNF- 伪 and IL-1 尾 in P-PDLSCs was significantly higher than that in H-PDLSCs (68.80 卤6.70 vs 34.10 卤3.07). The gene expression level of TNF- 伪 in P-PDLSCs was 1.4 times higher than that in H-PDLSCs (P0. 011). The gene expression level of IL-1 尾 also increased 1.7-fold (P0. 009). The expression of p38 in P-PDLSCs was higher than that in H-PDLSCs. After osteogenic induction, the expression of p-p38 increased, but the expression of p38 decreased. After SB-203580 interference, the expression of Runx2 and ALP in PDLSCs decreased significantly (H-PDLSCs0.044, 0.036). P-PDLSCs: P0.0170.004), the number of mineralized nodules decreased. Conclusion in chronic inflammatory microenvironment, p38 MAPK is involved in the inflammatory response of cells, and the osteogenic differentiation ability of PDLSCs under the action of p38 inflammatory microenvironment is also significantly inhibited.
【作者单位】： 中国人民解放军总医院第一附属医院口腔科;北京军区总医院口腔科;中国人民解放军总医院老年口腔病科;中国人民解放军总医院口腔医学研究所;
【基金】：国家自然科学基金(31200741) 中国博士后科研基金(2013M532108) 北京市科技新星计划(Z14144000180000)~~
【分类号】：R780.2

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：2397154