VHL调控口腔鳞癌上皮间质转化的实验研究

发布时间：2019-03-01 09:56

【摘要】：目的 VHL的表达缺失与多种人类恶性肿瘤的发生发展有关,但在口腔鳞癌中的作用还不清楚。前期实验显示上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)与口腔鳞癌的侵袭及转移关系密切。本研究旨在检测VHL在口腔鳞癌中的表达,分析VHL和EMT的关系,并探索VHL调控口腔癌鳞癌EMT的机制。方法 1.收集天津医科大学肿瘤医院口腔鳞癌手术标本80例作为实验对象,并取13例癌旁组织作为对照,应用免疫组化SP法检测VHL、HIF-1α及EMT相关蛋白(β-catenin、Snail、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2/9表达,χ2检验或Fisher确切检验分析VHL、HIF-1α及EMT相关蛋白的表达与口腔鳞癌患者临床病理特征之间的关系。Spearman等级相关分析VHL与EMT相关蛋白的关系。应用Kaplan-Meier法绘制患者生存曲线,Log-rank检验分析各指标与术后5年生存率的相关性,Cox回归分析各种预后因素的独立预后意义。 2.采用lipofectamine2000介导VHL基因表达质粒pCDNA3-VHL转染Tscca及Tca8113P160舌鳞癌细胞,Western blot检测恢复VHL蛋白表达效果。观察转染后细胞形态学变化,MTT法测定细胞增值率变化；Transwell体外迁移实验、划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力变化；Western blot、免疫荧光实验检测VHL及EMT相关蛋白表达。结果 1.VHL在口腔鳞癌组织中的表达阳性率(31.3%)明显低于癌旁组织(69.2%,P=0.013)。癌组织中VHL在高分化及非淋巴转移组中的表达分别高于中低分化组和淋巴结转移组。β-catenin、N-cadherin、E-cadherin、MMP-2、MMP-9表达和淋巴结转移显著相关,HIF-1α表达和肿瘤T分期有关。VHL表达和β-catenin、Snail、E-cadherin、MMP-2、HIF-1α表达呈负相关。单因素生存分析结果显示VHL阳性患者的5年生存率(56.0%)明显高于阴性患者(23.6%,P=0.002)。 COX模型分析显示VHL表达,肿瘤分化程度,有无淋巴结转移是口腔鳞癌患者的独立预后因素。 2.在VHL低表达的Tscca及Tca8113P160舌鳞癌细胞中转染VHL基因表达质粒pCDNA3-VHL,'恢复VHL的表达。pCDNA3-VHL组细胞形态学发生变化,表现出上皮细胞特征。恢复VHL表达的细胞增殖率较对照组明显受到抑制；通过Transwell小室碳酸酯膜的细胞数少于对照组,划痕闭合减慢。细胞恢复VHL表达后β-catenin, snail, N-cadherin、MMP-2/9、HIF-1α、VEGF蛋白表达下调,E-cadherin表达上调。免疫荧光及western blot检测核浆分离蛋白证实VHL抑制β-catenin在细胞核中的表达。结论 VHL蛋白在口腔鳞癌中呈低表达并和肿瘤分化、转移、预后有关,VHL的表达缺失与口腔鳞癌EMT过程相关,并且可能通过调控EMT影响口腔鳞癌的侵袭转移和预后。在舌鳞癌细胞系中恢复VHL表达后细胞形态发生改变,增殖、迁移、侵袭能力减弱且EMT相关蛋白表达量改变。VHL可能通过β-catenin及下游分子调控口腔鳞癌的EMT过程。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.8

【参考文献】