富血小板纤维蛋白对人牙周膜细胞体外增殖及分化的影响

发布时间：2020-03-27 06:05

【摘要】：目的：观察富血小板纤维蛋白对人牙周膜细胞体外增殖及分化的影响。 方法： 1.人牙周组织的获取 组织来自于临床因正畸治疗而拔除的健康、无龋坏的双尖牙,患者年龄为13～18岁，无性别差异。 2.人牙周膜细胞的培养 将牙根中1/3的牙周膜轻轻刮除，并剪成1×1mm3大小，，采用组织块法进行细胞培养。本实验取第3～6代牙周膜细胞用于后续实验。 3.人牙周膜细胞的鉴定 （1）倒置相差显微镜形态学观察。 （2）波形丝蛋白、角蛋白免疫组化。 4.观察不同浓度PRF渗出液（4%、20%、100%）对人牙周膜细胞增殖的影响 （1）CCK-8检测细胞增殖情况。 （2）流式细胞仪测定细胞周期。 5.观察不同浓度PRF渗出液（4%、20%、100%）对人牙周膜细胞分化的影响 （1）碱性磷酸酶活性的检测。 （2）牙周膜细胞进行矿化诱导后，进行茜素红染色，并将与钙结合的茜素红溶解到溶液中，进行半定量分析。 （3）Western Blot对细胞Runx2蛋白表达情况进行分析。 结果： （1）原代所培养的人牙周膜细胞呈长梭型，生长速度快，并以漩涡状分布。免疫组化染色中角蛋白染色阴性,波形丝蛋白染色阳性。 （2）不同浓度的PRF渗出液（4%、20%、100%）对人牙周膜细胞增殖和分化能力的影响 ①人牙周膜细胞增殖情况: 在CCK-8实验中，20%、100%PRF组在所设时间点均可显著地促进牙周膜细胞增殖(P＜0.05)。4%PRF组在day1能显著地促进细胞增殖(P＜0.05)，然而在day2和day3，其促进效果不显著（P＞0.05）。 在细胞周期测定中，各实验组的细胞增殖指数（PI）均明显较对照组高(P＜0.05)。 ②细胞碱性磷酸酶活性测定: 与对照组相比，100%PRF组展现出最高水平的碱性磷酸酶活性，并且差异具有统计学意义(P＜0.05),然而4%PRF组的碱性磷酸酶活性在day7和day14增加不显著（P＞0.05）。 ③茜素红染色以及钙化颗粒的半定量分析： 成骨诱导2W后，在倒置显微镜下能观察到矿化颗粒的形成，并且MM+100%PRF组所形成的颗粒数量最多，然而在对照组很难发现矿化颗粒。此外，矿化颗粒经CPC溶解后，吸光度（λ=570nm）值表明100%PRF组以及矿化组+100%PRF组细胞外钙沉积分别较对照组以及矿化组的要高。 （4） Runx2蛋白含量的测定 相对于对照组以及矿化组，100%PRF组以及MM+100%PRF组在不同时间点Runx2蛋白表达均上调。 结论： 1.PRF以剂量依耐性的方式促进人牙周膜细胞体外增殖。 2.PRF能促进牙周膜细胞在体外的分化。
【图文】：

表 3.1 波长 450 nm 下所测定的 OD 值（ ±s ,n=5）24h 48h 72h对照组 0.485±0.031 0.765±0.011 1.047±0.0104%PRF(E3) 0.524±0.007 0.798±0.012 1.088±0.05220%PRF(E2) 0.543±0.035 0.906±0.028 1.171±0.053100%PRF(E1) 0.604±0.015 1.086±0.045 1.373±0.024
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R781.42

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 孙洁;张剑明;李彦秋;;富血小板纤维蛋白超微结构的观察与探讨[J];口腔医学研究;2010年01期

2 江龙;朱亚琴;;改良组织块法体外培养人牙周膜细胞和牙髓细胞[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2008年04期

本文编号：2602574